放射诱导定向基因治疗阻断肺放射性纤维化的体外实验研究

摘要

胸部肿瘤中,食管癌、非小细胞肺癌是严重危害国人健康常见的两种恶性肿瘤,70﹪患者需要接受放疗,肿瘤区域物理或生物效应剂量的提高将有助于提高肿瘤局控率和生存率,但放射剂量的提高也将相应增加放疗严重并发症放射性肺纤维化的发生率和程度.因此若能阻断肺的放射性纤维化过程,将提高肺的放射耐受性,从而提高胸部恶性肿瘤放疗疗效.众多研究已显示TGF-β1(转化生长因子β1)是放射性肺纤维化发生发展的重要作用因子,而TGF-β1在细胞内的信号传导通路可被Smad7蛋白所阻断,且研究也已证实通过Smad7蛋白阻断TGF-β1的作用可以达到防止肺纤维化发生发展的目的.但TGF-β1在体内有着广泛的生理功能,无目标地阻断其作用必将产生一系列其它生理病理变化.Egr-1(早期生长反应因子1)基因的启动子可在电离辐射刺激下诱导下游基因的表达,若能通过该启动子调控Smad7基因的表达,则可以将Smad7蛋白阻断TGF-β1信号传导通路的作用局限于放射线照射范围内,从而在达到防止放射性肺纤维化目的的同时又最大限度地降低了发生新的病理变化的可能性.为了证实这一设想的可行性,我们利用分子克隆技术构建出含有Egr-1基因启动子和Smad7 cDNA的重组复制缺陷型腺病毒,在成纤维细胞内研究启动子活性及表达的Smad7蛋白活性,取得了令人鼓舞的结果.目的:构建含有Egr-1基因启动子和Smad7 cDNA的重组复制缺陷型腺病毒,研究放射线诱导Egr-1基因启动子调控Smad7体外表达的时间、剂量效应,并验证体外表达的Smad7蛋白是否具有阻断TGF-β1信号传导通路从而阻断成纤维细胞胶原合成的生物学活性.结论:上述结果表明,通过基因工程制备的重组复制缺陷型腺病毒具有生物学活性,在感染成纤维细胞后可通过放射线激活启动子调控Smad7 cDNA表达Smad7蛋白阻断TGF-β1刺激成纤维细胞胶原合成增加的作用.为下一步研究该重组腺病毒是否能阻断小鼠放射性肺纤维化的动物实验奠定了坚实的基础.

目录

前言

材料与方法

结果

讨论

总结

参考文献

综述TGF-B与放射性肺纤维化研究进展

致谢

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