人血浆HDL作为抗肿瘤药物载体的研究

摘要

本课题是利用天然磷脂和HDL脱脂后载脂蛋白及抗肿瘤药物人工重组成HDL-药物复合物，以肝癌细胞SMMC-7721作为模型细胞，肝L02细胞作为正常对照细胞研究对肝癌细胞的选择性作用及动物体内药物动力学和组织分布。用大豆卵磷脂，脱脂载脂蛋白和阿克拉霉素(ACM)通过超声方法重组形成HDL-ACM复合物(rHDL-ACM)，经过SephadexG-25分离纯化。通过琼脂糖电泳，超离心法，电镜测定其迁移率，密度，包封率和粒径及形态。用肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞L02作为模型，用天然HDL竞争性细胞结合研究其对细胞的结合特性，用MTT法比较rHDL-ACM与游离ACM(fACM)对SMMC-7721细胞的毒性作用，rHDL-ACM对SMMC-7721细胞和L02细胞的细胞毒性作用，及其对肝癌细胞SMMC-7721的选择性。静脉注射rHDL-ACM和fACM，通过加入荧光增强剂ALCl3用荧光分光光度计检测法研究大鼠体内血药动力学和组织分布，建立HPLC测定小鼠体内血药动力学方法。研究rHDL-ACM在体外4℃，pH8.0，10mMTris缓冲液；pH7.0，10mM磷酸缓冲液和pH6.5；10mM磷酸缓冲液中稳定性。在-70℃下，pH7.0，10mM磷酸缓冲液；pH6.5，10mM磷酸缓冲液中稳定性。及冻干复溶对rHDL-ACM稳定性的影响。本实验结果显示rHDL-ACM的迁移率(0.34)比天然HDL(0.16)稍快一些。包封率为92％，纯度大于90％。超离心后rHDL-ACM密度在1.063-1.21mg/ml范围与天然HDL相同。我们的研究结果还显示HDL是一类有应用前景的肝靶向抗肿瘤药物载体，有可能为肝癌治疗提供一种新的方法。

目录

前言

实验部分

一、材料与仪器

二、实验方法

(一)重组高密度脂蛋白-阿克拉霉素(rHDL-ACM)制备

(二)rHDL-ACM理化性质鉴定

(三)rHDL-ACM的粒径分布和形态

(四)细胞实验

(五)统计方法

(六)动物体内血液动力学及组织分布

(七)rHDL-ACM体外稳定性

结果部分

一、人血浆HDL的分离纯化及鉴定

二、HDL载脂蛋白(apoHDL)制备

三、异硫氰酸荧光素标记apoHDL

四、FITC标记对apoHDL的细胞结合特性影响测定

五、rHDL-ACM制备

六、rHDL-ACM与天然HDL对肝癌细胞SMMC-7721的竞争性结合实验

七、药物在细胞中的吸收

八.细胞毒性试验(MTT法)

九、动物体内血液动力学及组织分布

十、rHDL-ACM体外稳定性

讨论部分

结论

本课题创新性

参考文献

综述 脂蛋白作为药物载体系统研究进展

一、细胞毒药物与药物载体

一、乳糜微粒作为药物载体

二、VLDL作为药物载体的研究

三、LDL作为药物载体的研究

四、高密度脂蛋白作为药物靶向载体

结论

参考文献

致谢

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