人体LYC4基因克隆暨LYC4、LYC3、Cdv-1R与生殖关系的初步研究

摘要

本文是对人体LYC4基因克隆暨LYC4、LYC3、Cdv-1R与生殖关系的初步研究，分为三个部分进行了探讨。本论文第一部分的工作是关于一个人体附睾特异表达的免疫活性蛋白基因（LYC4）的克隆和功能初步研究，研究结果提示男性生殖系统在存在血睾、血附睾屏障而与获得性免疫隔绝的情况下，附睾上皮细胞会分泌包括LYC4在内的特异的防御蛋白，阻止可能的上行感染，保证生殖细胞在睾丸中的正常发育、在附睾中的成熟的安全运行。本论文的第二部分工作是探讨人体类溶菌酶家族成员在受精中的潜在作用，结果发现LYC3由附睾上皮细胞分泌并结合到精子之上，来参与可能的受精作用。卵子上广泛分布的GlcNAc可能为LYC3、LYC4、LYC5参与受精作用的受体。第三部分工作是研究Cdv-1R基因在小鼠睾丸、附睾中的表达情况，研究发现，Cdv-1R可能参与附睾中精子孵育成熟时获得向前游动能力的肉碱能量途径。本文第一部分克隆并鉴定了一个新的在人体附睾上皮特异表达的基因，还发现它具有杀菌活性。这不仅在理论上使我们对人类基因组学和生殖生物学有了更深入的认识，提示男性生殖系统的附睾上皮，特别是附睾头部会分泌表达包括LYC4在内的抗菌蛋白来参与天然免疫，保护精子细胞的发育及成熟。另外LYC4的研究提示了其在人体生殖系统感染及由此引起的不育方面的应用前景。第二部分的研究工作提示了人体类溶菌酶家族成员LYC3、LYC4、LYC5参与精卵结合的受精作用，这不仅在功能基因组学的研究方面使人们对基因的多功能性及基因重复的演化方面有了更多认识，而且也促进了对生殖生物学中受精机制的研究。同时也提示了它们在生殖干预方面作为分子靶点的可能应用前景。第三部分的研究通过揭示Cdv-1R基因在小鼠附睾、睾丸中的特征性表达，特别是发现它与OCTN2在生殖系统中表达模式的相似性提示了Cdv-1R可能参与精子获得可动性的肉碱能量途径。

目录

论文说明：指导小组成员

第一章LYC4的基因克隆、人体附睾上皮特异表达及其抗菌活性

前 言

材料和方法

一、材料

二、主要仪器设备

三、计算机分析软件

四、方法

结 果

1.人体类溶菌酶基因LYC4的克隆和鉴定

2.LYC4基因的northern blot表达谱分析

3.LYC4对睾丸和附睾组织的原位杂交

4.LYC4重组蛋白的表达、纯化

5.LYC4重组蛋白的杀菌活性

6.LYC4抗体的制备和鉴定

7.LYC4的睾丸、附睾组只的免疫组化

8.小鼠睾丸、附睾组织的LYC4的Western blot

9.人体精液LYC4的Western blot

10.细胞转染lyc4-pcDNA3.1C上清的杀菌活性

讨 论

参考文献

第二章LYC3等人体类溶菌酶家族成员在受精中潜在作用的探讨

前 言

材料与方法

一、材料

二、主要仪器设备

三、计算机分析软件

四、方法

结 果

1.人体类溶菌酶家族成员的氨基酸序列比较

2.人体类溶菌酶基因家族的基因组结构

3.人体类溶菌酶家族成员组织表达谱比较

4.LYC1蛋白的表达和纯化

5.自己制备的人体类溶菌酶家族成员LYC1、LYC2、LYC3、LYC4、LYC5抗体的鉴定

6.人体睾丸、附睾组织LYC3的免疫组化

7.人体精子LYC3的细胞免疫荧光试验

8.人体精子、精液LYC3的Western blot

9.HEPT(hamster egg penetration test)实验结果及统计分析

讨 论

参考文献

第三章Cdv-1R基因在小鼠睾丸、附睾中的特征性表达

前 言

材料和方法

一、材料

二、主要仪器设备

三、分子生物学计算机分析软件

四、方法

结 果

讨 论

参考文献

综 述哺乳动物及人体的主要抗菌基因或蛋白

附 录博士生期间发表论文情况

致谢

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