染色体8p上肝癌转移相关基因的筛选与初步验证

摘要

目的：已发现人类多种类型的肿瘤中存在8号染色体短臂(8p)的改变；本所既往的研究发现染色体8p缺失与肝癌转移有关，为进一步筛选肝癌转移相关基因提供了靶点。本课题拟在此基础上，从基因表达水平进一步探讨染色体8p与肝癌转移的关系，并且筛选出定位于染色体8p的与肝癌转移相关的基因。 方法：首先定制包括染色体8P上全部322个基因的寡核苷酸芯片。然后运用定制芯片，以10例来自肝海绵状血管瘤患者的正常肝脏组织RNA混合后形成的样本池为对照，检测伴、或不伴有转移的肝癌组织标本各20例(20例伴有转移者，同时检测肝癌原发瘤和转移灶组织标本)中相关基因的表达水平。在不同转移潜能的细胞株(包括无转移潜能肝癌细胞株Hep3B、低转移潜能肝癌细胞株MHCC97-L、高转移潜能细胞株MHCC-LM6，正常对照采用正常肝细胞株Changliver)中进一步验证。经过芯片杂交扫描统计分析后得出位于染色体8P上的与肝癌转移相关的基因。并用RT-PCR和Real-timePCR对筛选出的基因进行了初步验证。 结果：不同转移潜能的肝癌组织或细胞较正常肝组织或细胞均存在差异表达的基因；当荧光强度设定为大于800的水平时，在80％的肝癌组织中存在差异表达的情况下，筛选出了DEFB1,MSRA,CLU,FGL1等在高转移潜能的肝癌组织中明显下调的差异表达基因，并且在不同转移潜能的细胞系中进一步得到证实。RT-PCR和Real-timePCR实验也表明它们在伴转移的肝癌组织中显著下调。 结论：染色体8p与肝癌转移相关，定位与8p的DEFB1、MSRA、CLU、和FGL1是候选的肝癌转移抑制基因，值得进一步深入研究。

目录

前言

第一部分利用寡核苷酸芯片筛选染色体8p上肝癌转移相关基因

材料与方法

结果

1.RNA抽提后质检结果

2.芯片实验结果

讨论

第二部分对差异表达基因DEFB1,MSRA,CLU,FGL1在不同转移潜能肝癌样本中的初步验证

材料与方法

结果

1.RT-PCR结果

2.通过常规RT-PCR确定real-timePCR反应条件

3.real-timePCR检测过程

4.40例不同转移潜能肝癌组织中的基因表达水平的检测结果

讨论

参考文献

综述肿瘤的分子分类与分期

综述 参考文献

致谢

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