组织细胞DNA降解与死亡时间的相关性研究

摘要

目的:摸索运用末端转移法、原位末端标记法及琼脂糖电泳法研究机体死后不同时间段DNA的降解程度及规律，探讨该规律在推断死亡时间方面的可行性，为实际工作中推断死亡时间提供一个科学的依据。 方法:取SD大白鼠，颈椎错位处死，置于室温20℃的环境下，在死后不同时间段(0h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、24h、36h及48h)取材，所取检材为肝、肾、脾，按照取材死后时间段的不同分为12组。课题共分三个部分:第一部分：运用末端转移法检测DNA降解：剪碎组织，酚氯仿提取组织DNA；紫外可见分光光度计在260nm、280nm波长处检测DNA提取液的吸光度值，获得DNA的纯度和浓度；每个死亡时间段均取1ug DNA，加入5U TdT酶、5nmoldUTP，在37℃水浴中相互反应1h；用无水乙醇和乙酸铵共沉淀DNA，保留液体：紫外可见分光光度计在260nm波长处检测液体中反应剩余的dUTP的吸光度。第二部分：运用原位末端标记法检测DNA降解：组织用10％中性多聚甲醛固定；常规脱水、透明、石蜡包埋，切片；组织印片制作，甲醛固定；用细胞凋亡检测试剂盒检测，步骤按照试剂盒说明书；脱水、透明、中性树酯封片；显微镜下观察，拍照，图像分析。第三部分：酶切琼脂糖电泳检测DNA降解：取1ug DNA加2U MluI酶，酶切后琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，观察结果。 结论:机体死后组织细胞DNA随死亡时间延长而不断降解，并具有一定的规律性。末端转移法与原位末端标记法都具有敏感性强、易操作等优点，综合运用，可更为准确、可靠的推断死亡时间，特别是早期死亡时间的推断。在DNA酶切琼脂糖电泳实验上，对早期死亡时间推断无实际使用价值，考虑在后期进一步研究中，延长检测DNA降解的死亡时间，可望观察到死后细胞DNA的降解规律。

目录

前 言

研究一应用末端转移法研究大鼠组织细胞DNA降解与死亡时间的关系

引 言

材料和方法

结 果

讨 论

研究二应用原位末端标记法研究大鼠组织DNA降解与死亡时间的关系

引 言

材料和方法

结 果一

结 果二

讨论

研究三应用限制酶切DNA琼脂糖电泳研究大鼠组织DAN降解与死亡时间的相关性

引 言

材料和方法

结 果

讨 论

总 结

致 谢

参考文献

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