孕鼠维生素A缺乏及DMH诱导对子代鼠肾发育及肿瘤发生的影响

摘要

肾母细胞瘤是小儿最常见的肾肿瘤，其组织来源及发生学一直受到众多学者的关注。近年来研究发现，肾发育过程中的胚基残留、分化障碍可能是肾母细胞瘤发病的原因之一。而维生素A(Vitamin A，VA)在胚胎发育中起了重要的关键性的调控作用，维生素A缺乏可能导致胚胎发育的畸形和肿瘤的发生。因此研究维生素A在胚胎发育中的作用及其与肿瘤形成的关系是国内外的一大热点。 本研究在前期研究的基础上，建立维生素A缺乏和DMH诱导的孕鼠模型，旨在通过对其子代鼠胚胎肾发育和肿瘤形成的观察、维甲酸受体(RXR α mRNA)基因以及其他相关基因(MKRNA和GDNFmRNA)检测等，揭示肾母细胞瘤的发病原因，并从分子生物学水平上探讨其可能的机理，从而为肾母细胞瘤的预防和探索新的治疗途径提供理论依据。 材料和方法： 取wistar雌鼠25只，12周龄，体重200-220g，按干预条件随机分为以下几组：(A)维生素A缺乏饮食组6只；(B)正常对照组3只；(C)DMH+维生素A缺乏饮食组10只；(D)DMH+正常饮食组6只。所有雌鼠喂养2周后与健康wistar公鼠交配成孕鼠。其中C组和D组孕后第二天于其左季肋皮下注射浓度为0.35％的DMH(200mg/kg)，A组和B组孕后第二天于其左季肋皮下注射相当体积的EDTA生理盐水。产后第二天每组分别随机抽取15只子代鼠立即处死，检测其血清维生素A浓度、肾发育形态和肾源性剩余(Nephrogenic Rests，NRs)形成。所有母鼠于哺乳期结束后立即处死。余子代鼠予正常饮食，至出生后365天处死，检测肾母细胞瘤和肾源性剩余的形成，RXR α、MK、GDNF等基因mRNA的表达。 结果： 各组孕鼠的产仔量分别为：维生素A缺乏饮食组孕鼠6只中，1只孕鼠出现食子现象，实验子代鼠共51只；正常对照组孕鼠3只，实验子代鼠共44只；DMH+维生素A缺乏饮食组孕鼠10只中，3只孕鼠发生胎盘吸收，实验子代鼠共47只；DMH+正常饮食组孕鼠6只中，1只孕鼠发生胎盘吸收，实验子代鼠共51只。其中两组维生素A缺乏饮食孕鼠的子代鼠出生后出现了角膜溃疡、皮肤溃疡、肢体瘫痪等表现。 经出生后立即补充正常饮食症状逐渐改善。维生素A缺乏饮食组和DMtt+维生素A缺乏饮食组新生鼠血清维生素A浓度分别0.51±0.13μmol/L和0.49±0.08μmol/L，达到维生素A缺乏期，且分别低于对照组和DMH+正常饮食组新生鼠血清维生素A浓度，差异均有显著统计学意义(P<0.01)。病理检查发现两组维生素A缺乏饮食组新生鼠肾组织中未成熟的肾小球和肾小管较两组正常饮食组的新生鼠多见。其中维生素A缺乏饮食组有18例检出NR(60％，18/30)，正常对照组有8例检出NR(26.7％，8/30)，差异有统计学意义(P=0.018)；DMH+维生素A缺乏饮食组有21例检出NR(70％，21/30)，DMH+正常饮食组有10例检出NR(33.3％，10/30)，差异亦有统计学意义(P=0.009)。 出生后365天处死的子代鼠检测发现，29只对照组无肿瘤发生，36只维生素A缺乏饮食组检出肾母细胞瘤5个(13.9％)，32只DMH+维生素A缺乏饮食组检出肾母细胞瘤11个(34.4％)，36只DMH+正常饮食组检出肾母细胞瘤4个(11.1％)。维生素A缺乏饮食组和正常对照组子代鼠成瘤率的差异有统计学意义(P=0.046)，DMH+维生素A缺乏饮食组和DMH+正常饮食组子代鼠成瘤率的差异亦有统计学意义(P=0.021)。母鼠孕期DMH注射的两组子代鼠成瘤率为22.1％(15/68)，母鼠孕期EDTA注射的两组子代鼠成瘤率为7.7％(5/65)，差异有统计学意义(P=0.018)。维生素A缺乏饮食组NR检出22个(30.6％，22/72)，正常对照组NR检出4个(6.9％，4/58)，DMH+维生素A缺乏饮食组NR检出28个(43.7％，28/64)，DMH+正常饮食组NR检出14个(19.4％，14/72)。维生素A缺乏饮食组和正常对照组子代鼠NR检出率的差异有显著统计学意义(P=0.001)，DMH+维生素A缺乏饮食组和DMH+正常饮食组子代鼠NR检出率的差异亦有显著统计学意义(P=0.002)。母鼠孕期DMH注射的两组子代鼠NR检出率为30.9％(42/136)，母鼠孕期EDTA注射的两组子代鼠成瘤率为20.0％(26/130)，差异有统计学意义(P=0.029)。维生素A缺乏饮食组肿瘤组织的RXR α mRNA表达水平(3.17±0.15)较正常对照组肾组织(3.58±0.20)明显降低；DMH+维生素A缺乏饮食组肿瘤组织的RXR α mRNA表达水平(2.91±0.14)较DMH+正常饮食组(3.25±0.18)亦明显降低，差异均具有显著统计学意义(P<0.01)。维生素A缺乏饮食组肿瘤组织的MKmRNA表达水平(2.68±0.05)较正常对照组肾组织(2.47±0.14)明显升高；DMH+维生素A缺乏饮食组肿瘤组织的MKmRNA表达水平(2.86±0.10)较DMH+正常饮食组(2.60±0.07)亦明显升高，差异均具有显著统计学意义(P<0.01)。正常对照组肾组织几乎未检测出GDNFmRNA的表达，明显低于维生素A缺乏饮食组肿瘤组织的GDNFmRNA表达水平(2.42±0.06)；DMH+维生素A缺乏饮食组肿瘤组织的GDNFmRNA表达水平(2.54±0.09)较DMH+正常饮食组(2.39±0.04)亦明显升高，差异均具有显著统计学意义结论： 1．大鼠孕期维生素A缺乏会导致子代鼠肾源性剩余增加，肾母细胞瘤发生率增高。在相同的孕鼠DMH诱导的前提下，孕期维生素A缺乏组子代鼠肾发育差，肾母细胞瘤发生率高。 2．大鼠孕期DMH诱导会导致子代鼠肾源性剩余增加，肾母细胞瘤发生率增高。 3． RXR α、MK、GDNF等基因参与肾母细胞瘤的发生，维生素A可能通过上调RXR α基因的表达水平和下调MK、GDNF基因的表达水平来促进肾脏发育分化和降低肿瘤发生。 4．母亲孕期维生素A的缺乏和致癌物的接触可能与孩子胚胎性肿瘤的发生有关，孕期补充适量的维生素A和避免接触致癌物对胚胎性肿瘤的预防有重要意义。

目录

声明

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

附录