组织因子途径抑制物对动脉粥样硬化早期阶段组织因子的影响

摘要

目的:本实验初步探讨了在动脉粥样硬化形成早期,以VRnew质粒为载体,长期低剂量在ApoE-/-小鼠体内自发表达人源性组织因子途径抑制物(tissuefactor pathway inhibitor,TFPI)能否对血管上稳态组织因子(tissue factor,TF)量的产生影响。
　　 方法:取3只8周龄雌性ApoE-/-小鼠,给予高脂饮食,2周后在小鼠双侧后肢肌肉内各注射30ul,浓度为1ug/ul的VRnew-TFPI质粒溶液,150V/cm脉冲电击8次。在转染后第4、14和20天分别采血200ul,以1∶9加入枸橼酸钠抗凝液抗凝,离心提取血浆,ELISA法测血中人源性TFPI浓度。取14只6周龄雌性ApoE-/-小鼠,按体重分为2组,通过高脂饮食构建动脉粥样硬化模型,2周后每只小鼠后肢肌肉内各注射浓度为1ug/ul的质粒溶液30ul,150V/cm脉冲电击8次。VRnew-TFPI组(7只)注射VRnew-TFPI质粒,VRnew组(7只)注射空载VRnew质粒。之后每隔2周重复一次,共6次。在小鼠20周龄时处死,游离出主动脉,制作石蜡切片,免疫组化标记血管TF抗原。摄片后以Image-Pro(R)Plus V6.0软件读取免疫组化标记的TF抗原显色区,读取光密度值和面积,计算平均光密度,t检验比较两组平均光密度值有无两组统计学差异,推断两组TF量有无统计学差异。
　　 结果:以ELISA方法检测小鼠转染质粒后血浆中人源性TFPI浓度,检测到转染后第4天总TFPI浓度为2.274±0.594 ng/ml:第14天浓度为1.676±0.069ng/ml;第20天浓度为0.486±0.3325ng/ml。两组小鼠根据8周龄时体重分组,VRnew-TFPI组7只小鼠平均体重18.34±1.90克,VRnew组7只小鼠平均体重18.85±1.39克。T检验两组小鼠体重无差异。20周龄小鼠在处死后直视下观察主动脉上存在白色动脉粥样硬化斑块,HE染色显微镜下血管可见斑块。免疫组化标记血管TF抗原后,Image-Pro(R) Plus V6.0获取血管上染色的TF抗原的光密度值和面积,计算平均光密度值:Vrnew-TFPI组平均光密度0.23±0.080D/cm,Vrnew组为0.34±0.10,t检验P＜0.05。
　　 结论:通过Vrnew质粒为载体在ApoE-/-小鼠体内长期低剂量表达TFPI蛋白,在动脉粥样硬化形成早期,可以减少小鼠主动脉血管内稳态TF的量。