γ射线对结合珠蛋白基因表达的诱导作用及功能初步研究

摘要

急性放射损伤的受照剂量早期判断对于急性放射损伤的治疗有着重要作用。为了寻找急性放射损伤的早期诊断指标，运用二维电泳筛选8Gyγ射线全身照射后小鼠血清中差异表达蛋白，并利用质谱技术对差异表达蛋白进行鉴定。结果发现，8Gyγ射线全身照射后小鼠血清中结合珠蛋白(Hp)水平较正常对照小鼠出现了明显的增加。随后，研究了电离辐射对Hp的诱导表达及增加的Hp在电离辐射损伤中的功能，得到了以下几个方面的结果： 1．小鼠受到全身γ射线照射后，血清中Hp变化规律的研究。小鼠受到1～12Gyr射线全身照射后收集血清，利用WbstemB10t分析血清中Hp的变化。结果显示，照射后血清中Hp水平较正常对照出现了明显增加，而且随着照射剂量的增加和照射后时间的延长，这种增加逐渐明显。提示，血清中的Hp蛋白水平可能成为急性放射损伤早期诊断指标。 2．小鼠受到全身γ射线照射后，造血免疫器官中Hp基因mRNAA水平变化研究。PT-PCR结果显示，照射后小鼠骨髓、胸腺、脾脏、肝脏、肺和小肠中Hp基因mRNA水平均较正常对照小鼠出现了明显的增加。 3．γ射线对THP-1．1细胞系中Hp的诱导表达作用及机制研究。利用单核白血病来源的细胞株THP-1细胞研究发现，γ射线能够诱导THP-1细胞中Hp基因mRNA和蛋白的表达，同时利用EMSA和抗体阻滞实验分析了参与γ射线诱导Hp表达的顺式作用元件和反式作用因子。结果发现，Hp基因的启动子区域中B和C区域对电离辐射诱导Hp的表达起着重要的作用，转录因子STAT3和C／EBPB-LIP参与了电离辐射诱导Hp表达的过程。 4．Hp在γ射线照射诱导细胞损伤中的功能研究。利用流式细胞术结合细胞免疫分析发现，小鼠外周血和骨髓有核细胞中只有部分细胞含有Hp，Hp阳性细胞的比例在照射后出现了明显的增加。骨髓细胞中，Hp阳性细胞对丫射线具有较强的抵抗性，转染Hp基因的COS一7细胞，对γ射线诱导的细胞凋亡亦具有较强的抵抗性。 本研究的创新性及结论：本研究将蛋白质组技术引入到放射医学领域，分析了全身丫射线照射后小鼠血清中蛋白表达的变化，这在国内外未见报道。发现血清中的Hp蛋白水平可能成为急性放射损伤的早期诊断指标。首先发现γ射线能诱导THP-1细胞中Hp的表达，初步分析显示细胞内表达的Hp可能具有抵抗γ射线诱导细胞凋亡的作用。

目录

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摘要

引言

第一部分γ射线照射后小鼠血清中差异表达蛋白的筛选

第二部分γ射线照射后，小鼠血清和脏器中Hp的变化

第三部分γ射线照射诱导Hp表达机制的探讨

第四部分Hp在辐射损伤中功能初步研究

结论

参考文献

致谢

附录1英文缩略词表

附录二主要试剂和设备

博士期间发表论著及获奖情况