Foxp3+调节性T细胞及相关细胞因子在斑块型和点滴型银屑病中的差异表达及功能研究

摘要

第一部分:Foxp3+调节性T细胞在斑块型和点滴型银屑病皮损中的差异表达
　　目的:了解寻常型银屑病皮损中Foxp3+细胞的数量与皮损严重程度及疾病分型、分期间的关系。
　　方法:通过免疫组化单染或双染技术对41例寻常型银屑病患者和10例正常对照皮肤中Foxp3+细胞的数量及Foxp3+细胞占CD3+细胞的比例进行检测。采用PSI评分或PASI评分分别对活检部位皮损的严重程度及疾病的严重程度进行评估。
　　结果:银屑病皮损中Foxp3+细胞主要位于真皮乳头层和网状层上方,表皮内较少,在皮损周边外观正常皮肤及正常对照皮肤中Foxp3+细胞较少或没有。银屑病皮损中Foxp3+细胞的数量与皮损的严重程度(PSI评分)呈正相关(p＜0.0001),斑块型银屑病皮损中Foxp3+细胞的数量高于点滴型,进展期高于稳定期,稳定期高于消退期(p＜0.05)。Foxp3+细胞占CD3+细胞的比例在真皮乳头层高于表皮层和真皮网状层(p＜0.0001),且从皮损的中央到边界到周边外观正常皮肤逐渐减少。
　　结论:Foxp3+细胞在斑块型和点滴型银屑病皮损中的差异表达提示两者可能代表银屑病皮损免疫反应过程中的不同阶段。Foxp3+细胞在真皮乳头层和皮损中央的高表达可能参与了银屑病皮损发生和维持。
　　第二部分:Treg与Th17细胞在斑块型和点滴型银屑病外周血中的差异表达
　　目的:了解寻常型银屑病患者外周血Treg与Th17细胞的水平与疾病分型间的关系。
　　方法:通过流式细胞学方法检测17例寻常型银屑病患者和12例正常对照外周血Foxp3+CD4+Treg细胞和IL-17+CD4+Th17细胞占CD4+细胞的比例。根据CD25和CD45RA的表达及CD25表达强弱的不同,分析了11例斑块型银屑病和10例正常对照aTreg、rTreg、non-Treg细胞的比例及CD4+CD25+T细胞中CD4+CD25high、CD4+CD25mid、CD4+CD25low细胞的比例。
　　结果:寻常型银屑病患者外周血Foxp3+CD4+Treg细胞的水平与疾病严重程度(PASI评分)正相关(p＜0.05)。斑块型银屑病患者外周血Foxp3+CD4+Treg细胞的水平高于点滴型(p＜0.0001);而IL-17+CD4+Th17细胞的水平低于点滴型(p＜0.0001)。斑块型银屑病患者CD4+CD25highTreg和aTreg细胞的比例显著高于正常人(p＜0.001,p＜0.0001),差异有统计学意义。斑块型银屑病患者CD4+CD25+T细胞的比例高于正常人(p＜0.05);但rTreg、non-Treg及CD4+CD25mid、CD4+CD25low细胞的比例在斑块型银屑病和正常人间无显著差异。
　　结论:Treg与Th17细胞间的失衡在斑块型和点滴型银屑病发病中起重要作用。
　　第三部分:Treg细胞对炎症细胞因子的抑制功能在斑块型和点滴型银屑病间的差异
　　目的:了解寻常型银屑病患者TGF-β-Foxp3+iTreg细胞对CD4+CD25-T细胞产生炎症细胞因子的抑制功能和血清中炎症细胞因子的含量与疾病分型间的关系。
　　方法:将CD4+CD25-T细胞在有或无TGF-β刺激下培养5天,通过流式细胞学方法检测TGF-β刺激后CD4+CD25-T细胞中CD25+Foxp3+细胞的比例,培养上清和血清中炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-17的含量通过ELISA方法检测。
　　结果:斑块型银屑病患者CD4+CD25-T细胞受TGF-β刺激后CD25+Foxp3+细胞的比例显著高于点滴型银屑病和正常对照(p＜0.0001),点滴型银屑病高于正常对照(p＜0.05),差异有统计学意义。斑块型银屑病患者CD4+CD25-T细胞受TGF-β刺激后产生更多的TNF-α;点滴型银屑病患者则产生更多的IL-6和IL-1β;但正常人CD4+CD25-T细胞受TGF-β刺激后TNF-α、IL-6和IL-1β的产生均降低。点滴型银屑病患者血清中IL-17和IL-6水平高于斑块型,但TNF-α水平低于斑块型。
　　结论:斑块型和点滴型银屑病患者TGF-β-Foxp3+iTreg细胞对CD4+CD25-T细胞产生炎症细胞因子的差异调控和血清中炎症细胞细胞因子的差异表达提示两者具有不同的免疫发病机理。