摘要
Abstract
缩略词
一 引言
1.1 线粒体概述
1.1.1 线粒体基因组的结构特点
1.1.2 线粒体基因组与核基因组的相互关系
1.1.3 mtDNA遗传学特征
1.1.4 线粒体与疾病
1.2 线粒体RNA聚合酶mtRNAP的研究背景
1.2.1 酶核心组分Rpo41
1.2.2 线粒体转录因子Mtf1
1.3 Rpo41和Mtf1蛋白的初步分析
1.4 本课题的主要研究内容、目的、意义及创新点
二 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 基因、酶类及基本材料
2.1.2 常用菌株
2.1.3 常用试剂
2.1.4 载体
2.1.5 常用缓冲液及自备试剂
2.1.6 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 构建原核表达载体
2.2.2 小量蛋白的表达及纯化
2.2.3 大规模发酵提取蛋白复合物
2.2.4 3C限制性蛋白酶切
2.2.5 蛋白质的离子交换层析纯化
2.2.6 蛋白的分子筛层析纯化
2.2.7 蛋白质的保存
2.2.8 Rpo41不同突变体的构建
2.2.9 启动子DNA
2.2.10 蛋白质复合物及启动子DNA的结晶及优化
三 结果与讨论
3.1 Rpo41和Mtf1的表达与纯化结果
3.1.1 全长Rpo41
3.1.2 全长Mtf1
3.1.3 全长Rpo41和全长Mtf1
3.1.4 Rpo41构建和全长Mtf1复合物
3.2 Rpo41降解条带质谱分析结果
3.3 结晶与结构解析结果
四 结论
五 参考文献
六 致谢
在学期间发表论文及所获奖励
