摘要
Abstract
第一章 综述
1 线粒体基因转录
1.1 线粒体功能和研究意义
1.2 线粒体基因转录研究进展
1.3 裂殖酵母线粒体基因转录研究进展
2 分子伴侣Hsp60与线粒体基因转录
2.1 Hsp60功能和研究意义
2.2 Hsp60和线粒体转录因子Mtf1相互作用研究进展
3 ETB介绍
4 本文研究意义
第二章 分子伴侣Hsp60与线粒体转录因子Mtf1体内相互作用
1 材料和仪器
1.1 质粒
1.2 引物序列
1.3 培养基
1.4 酵母转化实验试剂
1.5 串联亲和纯化(TAP)实验试剂
1.6 SDS-PAGE相关试剂
1.7 仪器
2 方法
2.1 菌株的构建
2.2 串联亲和纯化(TAP)
2.3 蛋白质的检测与验证
2.4 质谱检测
3 结果
3.1 TAP实验结果与分析
3.2 MALDI-TOF MS实验结果与分析
4 讨论
第三章 分子伴侣Hsp60与线粒体转录因子Mtf1体外相互作用
1. 材料和仪器
1.1 质粒
1.2 引物序列
1.3 培养基
1.4 其它试剂
1.5 仪器
2. 方法
2.1 质粒的构建
2.2 重组蛋白的表达纯化
2.3 GST-pull down实验
2.4 表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)
3. 结果
3.1 体外GST-pull down实验结果与分析
3.2 表面等离子共振(SPR)实验结果与分析
4 讨论
第四章 ETB体外抑制实验
1. 材料和仪器
1.1 Real-Time PCR引物序列
1.2 培养基
1.3 其它试剂
1.4 仪器
2. 方法
2.1 GST-pull down实验
2.3 裂殖酵母基因组DNA抽提
2.4 裂殖酵母总RNA的抽提
2.5 cDNA的合成
2.6 实时荧光定量PCR实验
3 结果
3.1 ETB体外抑制实验结果和分析
3.2 ETB对裂殖酵母细胞生长的影响
3.3 ETB抑制线粒体基因的转录
4 讨论
第五章 展望
致谢
参考文献
