摘要
Abstract
第一章 综述
1 细菌产生抗生素耐药性的机理
2 已知功能的RNA耐药型甲基转移酶
2.1 红霉素耐药性RNA甲基转移酶
2.2 卑霉素耐药性RNA甲基转移酶
2.3 rRNA Gm2270甲基转移酶
3 含硫多肽类抗生素及其耐药性产生机理
4 RNA甲基化的检测方法
4.1 引物延伸法
4.2 同位素标记后通过液闪仪检测
4.3 高效液相色谱与质谱联用
第二章 TSR、NHR的克隆、表达与纯化以及核糖体RNA底物的体外合成
1 材料
1.1 仪器
1.2 试剂
1.3 质粒与菌株
1.4 培养基及缓冲液
2 方法
2.1 TSR、NHR的克隆
2.2 TSR、NHR蛋白表达及纯化
2.3 蛋白浓度测定
2.4 核糖体RNA底物的体外合成
3 结果
3.1 TSR、NHR的克隆
3.2 TSR、NHR蛋白表达及纯化
3.3 两步法PCR扩增58bp RNA底物DNA模板
3.4 NHR与TSR比对结果及NHR蛋白的三维结构总览
4 本章小结
第三章 TSR、NHR的甲基转移酶活性
1 材料
1.1 仪器
1.2 试剂
1.3 缓冲液
2 方法
2.1 TSR及NHR蛋白最佳反应条件
2.2 甲基化位点A1067位突变研究
2.3 TSR、NHR蛋白对RNA底物的浓度依赖性
2.4 NHR蛋白突变体的甲基化能力
3 结果
3.1 TSR及NHR蛋白最佳反应条件
3.2 甲基化位点A1067位突变研究
3.3 TSR、NHR蛋白对RNA底物的浓度依赖性
3.4 NHR蛋白突变体的甲基化能力
4 本章小结
第四章 TSR、NHR蛋白与底物RNA的相互作用
1 材料
1.1 材料
1.2 试剂
1.3 缓冲液
2 方法
2.1 Gel shift检测TSR、NHR蛋白与RNA底物体外相互作用
2.2 Gel shift检测SAM对TSR、NHR蛋白与RNA底物体外相互作用的影响
2.3 TSR、NHR蛋白与RNA底物的亲和力测定
3 结果
3.1 Gel shift检测TSR、NHR蛋白与RNA底物体外相互作用
3.2 Gel shift检测SAM对TSR、NHR蛋白与RNA底物体外相互作用的影响
3.3 TSR、NHR蛋白与RNA底物的亲和力测定
4 本章小结
全文总结与展望
参考文献
致谢
