选择性雌激素β受体激动剂对巨噬细胞免疫调节作用及其分子机制

摘要

[目的]:雌激素β受体是1996年发现的第二种雌激素受体，近年来，雌激素β受体激动剂在一些如子宫内膜异位症，炎性肠炎等炎症疾病动物模型中观察到一定的治疗作用。虽然具体的机理尚不明确，但是它作为一种抗炎药物的前景受到越来越多的关注。本研究首先观察选择性雌激素β受体激动剂Diarylpropionitrile(DPN)对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型的影响，其次观察DPN对LPS诱导的细胞株巨噬细胞释放炎性因子的影响及DPN对RANTES诱导的巨噬细胞迁移的影响，并探索DPN对炎症通路核转录因子κB(Nuclear Factor-κB，NF-κB)的作用机制，为DPN可能的抗炎作用提供依据。
　　[方法]:用Western Blot的方法检测小鼠腹腔巨噬细胞和小鼠巨噬细胞株RAW264.7上ERβ的蛋白表达;ELISA法检测DPN给药对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞和巨噬细胞株RAW264.7产生炎症因子IL-1β、TNF-α、RANTES的影响;用免疫荧光法检测DPN对LPS刺激的巨噬细胞株RAW264.7炎症通路NF-κB上蛋白p65向核内转移的影响;用Western Blot检测DPN对LPS刺激的巨噬细胞株RAW264.7炎症通路NF-κB上蛋白p65磷酸化水平以及对IB的降解的影响。
　　[结果]:小鼠腹腔巨噬细胞和巨噬细胞株上均有ERβ的蛋白表达;DPN能显著抑制小鼠腹腔巨噬细胞和巨噬细胞株中LPS刺激的巨噬细胞趋化因子RANTES的表达，但对TNF-α无显著影响。DPN对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β无明显的增强作用，而对巨噬细胞株RAW264.7分泌IL-1β在高浓度时有明显的增强作用。DPN抑制RANTES诱导的RAW264.7的迁移，并能抑制IκB的降解从而抑制P65向核内转移及p65的磷酸化过程，最终抑制炎症通路NF-κB的激活转录。
　　[结论]:ERβ通过抑制巨噬细胞的趋化及分泌趋化因子而影响炎症过程。这种作用可能是通过抑制炎症通路NF-κB的活性而达到。

目录

缩略词表

摘要

引言

主要材料与试剂

(一)实验动物

(二)细胞培养主要试剂

(三)实验药物与试剂

(四)主要溶液及试剂配制

主要实验仪器和设备

实验方法

(一)小鼠腹腔巨噬细胞的提取

(二)细胞培养

(三)酶联免疫吸附实验(ELISA)

(四)细胞趋化实验

(五)Western Blot

(六)p65核转移的荧光染色

(七)统计分析

结果

一、小鼠腹腔巨噬细胞及小鼠巨噬细胞株RAW264．7上ERβ的蛋白表达情况

二、DPN对小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子表达的影响

三、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264．7炎症因子表达的影响

四、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264．7迁移的影响

五、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264．7中p65向核内转移的影响

六、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264．7 p65磷酸化水平的影响

七、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264．7 IκB蛋白水平的影响

讨论

参考文献

结论

研究方向

综述 雌激素受体β与子宫内膜异位症相关研究进展

致谢

论文发表

声明