尼古丁对子宫内膜癌ishikawa细胞系细胞增殖及雌孕激素受体表达的影响

摘要

一、背景和目的
　　 子宫内膜癌为女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一。近年来，由于人类寿命的延长和外源性雌激素广泛应用等原因，国内外子宫内膜癌发病率明显增加。子宫内膜癌的病因不十分清楚，但是大多数子宫内膜癌的发生与雌激素的长期作用有关。流行病学研究发现，吸烟妇女发生的子宫内膜癌等雌激素依耐性疾病的危险相对较低。这引起了研究者对香烟中碱类的主要成分--尼古丁的兴趣。虽然尼古丁对呼吸系统、消化系统、心血管系统及女性生殖内分泌方面有多重不良影响，但是尼古丁类似物的合成可以在一定程度上避免这些伤害，尤其是抗帕金森药物SIB-1508Y(商品名：阿替克林)的合成，更是让人们看到了将尼古丁及其类似物投入临床应用的希望。经过多年研究，目前研究者普遍认为吸烟的这一效应与香烟中主要成分尼古丁的抗雌激素作用有关。此外，近年来研究证明，“烟碱抗炎通路(nicotinic anti-inflammatory pathway)”能反馈性监测、调整炎症反应，尼古丁能特异性地激活烟碱受体，抑制炎症因子的表达，但其具体机制尚未能阐明。而雌激素具有显著的抗炎作用，探讨尼古丁对影响雌激素作用的机制亦对解释尼古丁的抗炎作用有所帮助。同时由于子宫内膜癌患者体内孕激素抵抗的存在，吸烟对孕激素的影响也逐渐得到关注，但在吸烟究竟对孕激素有何影响这一问题上现在的研究结论并不一致，仍需要更多的实验明确。由于本课题主要通过研究香烟中主要成分尼古丁的对子宫内膜癌Ishikawa细胞系细胞增殖及雌孕激素受体表达的影响，探讨尼古丁对子宫内膜癌细胞生长和受体表达作用，为进一步了解尼古丁抗雌激素及抗炎作用的机制以及子宫内膜癌的预防和治疗提供新的思路。
　　 二、方法
　　 本课题主要分为两部分：第一部分体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞，使用CCK8比色法检测不同浓度尼古丁、β-雌二醇、雌二醇+尼古丁分别作用0小时、24小时、48小时、72小时后对细胞增殖的影响。第二部分将不同浓度尼古丁、雌二醇、雌二醇+尼古丁分别作用24小时后的细胞予免疫荧光染色，通过流式细胞术检测细胞荧光染色阳性率，了解尼古丁作用对Ishikawa细胞雌孕激素受体表达的影响。
　　 三、结果
　　 第一部分结果显示，与对照组相比，不同浓度尼古丁作用对细胞增殖的影响并无统计学意义(P＞0.05)，雌二醇具有促进细胞增殖的作用(P＜0.05)，雌二醇的这种作用可以被尼古丁所抑制(P＜0.05)。第二部分结果显示，10-3M、10-4M、10-5M尼古丁及10-8M雌二醇作用均能降低Ishikawa细胞雌激素受体(ER)荧光染色阳性率(P＜0.05)，但不同组间雌激素受体荧光染色阳性率差异并无统计学意义(P＞0.05)。10-8M雌二醇+10-4M尼古丁作用的细胞雌激素受体荧光染色阳性率虽也较对照组降低(P＜0.05)，但却较尼古丁组及雌二醇组略有升高(P＜0.05)。10-3M尼古丁作用可增加Ishikawa细胞孕激素受体(PR)荧光染色阳性率(P＜0.05)，而10-4M、10-5M尼古丁则降低荧光染色阳性率(P＜0.05)，且10-5M尼古丁较10-4M尼古丁作用更为明显(P＜0.05)。而10-8M雌二醇可明显增加孕激素受体表达(P＜0.05)，与文献报道一致。尼古丁+雌二醇组细胞孕激素受体荧光染色阳性率虽较雌二醇组降低，却较10-4M尼古丁组明显升高(P＜0.05)。
　　 四、结论
　　 尼古丁并不能直接抑制子宫内膜癌细胞的生长，但是它可以拮抗雌激素的促细胞增殖作用。尼古丁可抑制雌激素受体的表达但并未观察到剂量依赖性。较大浓度的尼古丁可促进孕激素受体的表达而较低浓度的尼古丁则抑制孕激素受体的表达。