先天性肾尿路畸形临床分析及其与GEN1的关联性究

摘要

第一部分
　　目的:分析2005至2010年复旦大学附属儿科医院先天性肾脏和尿道畸形(CAKUT)诊断情况，为CAKUT的早期诊断提供线索。
　　方法:系统提取的住院诊断为CAKUT病例的病史资料，具有术中诊断或影像学诊断的病例统计分析CAKUT分类型构成、临床表现、诊断和治疗情况。
　　结果:1358例CAKUT患儿进入分析，占住院患儿的1.33％(1358/102442)。男913例，女445例，男女比例为2.05∶1;首次入院时平均年龄为(3.0±3.4)岁。
　　1.常态下诊断CAKUT的住院构成比2005至2010年呈缓慢增高趋势（P=0.004，Pearson卡方检验），纳入三聚氰胺B超筛查诊断的CAKUT数据2008年7～12月和2009年1～6月住院患儿构成比分别较常态诊疗数据上升0.72％和0.16％。
　　2.CAKUT构成比前4位的类型分别为PUJO（567例，41.8％）， VUR(217例，16.0％)，双集合系统（154例，11.3％），UVJO（143例，10.5％）;常态下诊疗诊断的4种主要CKAUT类型构成比在6年间变化趋势均不显著。
　　3.在1358例CAKUT患儿中，无临床症状的患儿占44％(592/1358)，主要通过产前B超发现（406例，29.9％），其次为三聚氰胺事件结石筛查（112例，8.2％）和体检（74例，5.4％）。因症状来院就诊的患儿占56％(766/1358)，主要为发热性尿路感染（270例，19.9％），腹部症状（217例，16.0％）和排尿异常(79例，5.8％)。
　　4.主要通过产前B超检查发现异常的CAKUT类型依次为:肾盂输尿管连接处梗阻（PUJO，241例，42.5％）、膀胱输尿管连接处梗阻（UVJO，60例，42.0％）、双集合系统（42例，27.3％）、肾发育不良、多囊肾和输尿管膨出。膀胱输尿管返流(VUR)以发热尿路感染诊断的比例为77.3％，6年间构成比变化不大。
　　5.1330例(98.0％) CAKUT患儿进行B超检查，1262例(94.9％)发现异常征象，其中VUR的B超异常检出率为68.5％（137/200例），余类型的B超异常检出率均＞94.0％。400/1358例(29.4％)行MCU检查以了解有无膀胱输尿管反流，行 MR（573例，42.2％）、IVP（516例，38.0％）、CT（209例，15.4％）了解泌尿系统形态，行DTPA（1061例，78.1％）、DMSA（308例，22.7％）了解泌尿系统功能。
　　6.因为产前筛查发现的PUJO和UVJO患儿平均年龄最小，其次为因为肾结石筛查和症状而诊断的患者。因产前筛查、肾结石筛查和症状就诊的PUJO患者患侧分肾功能分别为36.3％，41.0％和33.3％。因为症状就诊的PUJO患儿平均肾盂宽度是最严重的。
　　结论:本文为第一篇对于CAKUT病种详细分类并且进行临床分析的文章，文章中的所有病例均有明确的病因诊断以及详尽的病史资料，因此极大地丰富了对于CAKUT的认知以及对于CAKUT患儿患病状态的了解。CAKUT构成比以PUJO、VUR、双集合系统和UVJO最为常见。CAKUT疾病主要通过产前B超检查发现，其随访工作可使CAKUT患儿病情早期被干预。然而即使进行产前B超筛查，仍有部分CAKUT患儿被漏诊，且其生后病情隐匿，常常到青少年后才被发现，因此我们提出产前和产后联合筛查。这种筛查模式可有效发现这些漏诊的患儿，并能有效阻止病程进展，在肾功能还未失代偿的时候即进行干预，对于CAKUT早发现很重要。但是制定CAKUT早发现策略需要更深入的研究。
　　第二部分
　　目的:本研究对汉族CAKUT患者进行GEN1基因外显子碱基序列分析，探讨其与CAKUT发病的可能关系。
　　方法:根据GEN1变异小鼠的CAKUT表型，选择明确诊断的双肾盂双输尿管(36例)、单侧肾缺失（8例）、膀胱输尿管反流（VUR;43例）、肾盂输尿管连接处梗阻(PUJO;33例)、膀胱输尿管连接处梗阻（UVJO;14例）、肾发育不良（18例）患者作为病例组，共152例。96例泌尿系统B超正常的汉族儿童作为对照组。通过采受检者外周静脉血2ml于EDTA抗凝管，提取基因组DNA，应用PCR方法扩增GEN1基因全部编码外显子，对PCR产物直接进行DNA序列测定及变异分析。对于发现GEN1编码外显子变异的患者进行双向测序确认变异位点和变异类型，并采集其家属的病史和血样进一步分析变异意义。
　　结果:病例组中，3例存在GEN1错义突变，分别为c.314C＞G(T105R; PUJO、VUR各一例)、c.1609T＞C（C537R; VUR一例）和c.1730T＞C（T577I; PUJO一例），1例截短型突变c.1201C＞T（R401TER; UVJO一例），1例为同义突变c.786C＞T(S262S; UVJO一例)。这些变异均以杂合形式存在，变异检出率为3.9％(5/152)。在对照组中，均未检测出这5种变异。我们对一例PUJO(同时携带c.314C＞G和c.1730T＞C）、一例VUR(c.314C＞G)和一例UVJO(c.1201C＞T)变异患者的家属（生父和生母）进行了基因检测和病史获取，发现3名患者的变异均由父母遗传，其相同变异位点也为杂合状态。但父母双方B超检查未发现CAKUT表型。此外，还确定了基因库中10个已报道的GEN1基因多态性，但我们并未在病例组与对照组中发现其等位基因频率、基因型频率有统计学差异。
　　结论:本实验首次在CAKUT患者中进行GEN1所有编码外显子的变异分析，并发现3种错义突变和1个截短型突变。GEN1基因的作用机制尚未完全明确，本次发现的变异位点与CAKUT间的关系需要进一步研究。

目录

缩略语注释

摘要

前言

参考文献

第一部分 先天性肾尿路畸形临床分析

引言

对象和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 先天性肾尿路畸形与GEN1的关联性研究

引言

对象和方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

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