L-精氨酸对丙烯腈损伤心肌细胞的保护作用

摘要

第一部分:丙烯腈对心肌细胞的毒性作用
　　[目的]研究不同浓度ACN对大鼠心肌细胞H9c2生长、增殖、坏死及凋亡的影响。
　　[方法](1)大鼠心肌细胞H9c2的培养及传代。(2) ACN染毒浓度的筛选:选用5个不同浓度梯度，分别为0，1，10，100，1000μg/mL ACN与细胞共孵育24小时，并检测心肌细胞活力。(3) ACN染毒:根据筛选结果，选用5个不同浓度梯度，分别为0，30，100，300，1000μg/mL，混入细胞培养液后与细胞共孵育24小时。(4)分别观察各孔H9c2心肌细胞形态学、细胞活力检测、乳酸脱氢酶活性检测、细胞凋亡与坏死检测及细胞内microRNA208a和microRNA21的表达。
　　[结果](1)1μg/mL的ACN对细胞活性影响较小，而10，100，1000μg/mL三个浓度的ACN对细胞活性影响较大，P＜0.05，且IC50=270μg/mL。(2) ACN可使梭形细胞数量明显减少，不规则圆形细胞数量增多，排列松散，甚至出现细胞结构破坏产生细胞碎片。(3)100，300，1000μg/mL ACN对心肌细胞活力有影响，P＜0.05，而且ACN浓度与心肌细胞活力间存在剂量-效应关系。(4)100，300，1000μg/mL浓度ACN对心肌细胞的破坏导致LDH的释放增加，P＜0.05，而且ACN浓度与细胞培养上清液中LDH活性存在剂量-效应关系。(5)各ACN浓度组细胞以坏死为主，凋亡比例最高不超过4％，ACN染毒浓度与坏死比例之间存在剂量-效应关系。(6)与对照组相比(0μg/mL ACN)，各浓度ACN染毒均可引起心肌细胞microRNA208a及microRNA21表达的下调。
　　[结论]ACN对大鼠心肌细胞H9c2有明显毒性作用，在细胞形态、细胞活力、细胞破坏导致释放的LDH活性、细胞坏死等方面均有显著影响，而且呈现剂量-效应关系，microRNA208a及microRNA21可能参与了ACN对心肌细胞毒性作用的调控。
　　第二部分:L-精氨酸对丙烯腈损伤心肌细胞的保护作用
　　[目的]研究L-Arg预处理对不同浓度ACN造成大鼠心肌细胞H9c2损伤的保护作用。
　　[方法](1)大鼠心肌细胞H9c2的培养及传代。(2) L-Arg干预浓度的筛选:选用5个不同浓度梯度，分别为0，0.2，1，5，25mM浓度的L-Arg，预处理心肌细胞2小时，再以250μg/mL浓度ACN与细胞共孵育24小时，检测细胞活力。(3)L-Arg预处理+ACN染毒:根据筛选结果，选用25mM浓度L-Arg预处理细胞2小时，余同第一部分(3)。(4)同第一部分(4)。
　　[结果](1)与不加L-Arg相比，0.2，1，5mM浓度的L-Arg预处理对心肌细胞活性的保护作用较小，而25 mM浓度的L-Arg预处理对心肌细胞活性有显著保护作用，P＜0.05。(2) L-Arg可使心肌细胞形态受损减轻。(3) L-Arg预处理可使心肌细胞活力增加，在100、300μg/mL两个浓度的保护作用有统计学差异，但25 mM浓度的L-Arg预处理后不染毒ACN，心肌细胞活力较空白对照组也略有下降。(4)L-Arg干预后可降低细胞培养上清液LDH活性，而且在100、300μg/mL两个浓度有统计学差异。(5) L-Arg预处理后各ACN浓度组细胞仍以坏死为主，但L-Arg预处理在30、300、1000μg/mL ACN染毒浓度组有减少心肌细胞坏死的作用，而对细胞凋亡的保护作用不明显。(6)与单纯ACN染毒组相比，L-Arg预处理可使30、100ug/mL浓度ACN组心肌细胞microRNA208a及microRNA21表达的显著上调，而在300、1000ug/mL浓度ACN组未见microRNA208a及microRNA21表达上调。
　　[结论]L-Arg预处理对ACN致心肌细胞的毒性影响有一定保护作用，特别是在100-300μg/mL的ACN染毒浓度范围内比较明显，但25mM浓度的L-Arg本身对细胞亦有一定的损伤作用，microRNA208a及microRNA21调控可能参与L-Arg对ACN损伤心肌细胞的保护作用。

目录

主要缩略词

摘要

引言

第一部分 丙烯腈对心肌细胞的毒性作用

一、目的

二、材料和方法

三、结果

四、讨论

第二部分：L-精氨酸对丙烯腈损伤心肌细胞的保护作用

一、目的

二、材料和方法

三、结果

四、讨论

总结与展望

参考文献

致谢

综述

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