EGCG对Zn2+诱导的丝素蛋白构象转变过程的干预作用

摘要

神经退行性疾病是老年人群体高发疾病之一，其发病机制之一为相关蛋白发生构象转变并错误折叠和聚集形成富含β-折叠态的聚集体。本文通过ThT荧光光谱法、衰减全反射红外光谱法以及13C CP/MAS核磁共振谱法定性和定量研究金属离子Zn2+对神经退行性疾病模型蛋白——丝素蛋白构象转变过程的影响，以探索Zn2+的神经毒性作用机理。研究发现，低浓度Zn2+促进丝素蛋白由无规卷曲构象转变为折叠态构象，高浓度Zn2+抑制丝素蛋白构象转变。我们推测，Zn2+的存在对丝素蛋白分子内或分子间氨基酸残基的相互作用产生影响，从而影响丝素蛋白分子的构象。
　　通过ANS荧光光谱法、ThT荧光光谱法、衰减全反射红外光谱法以及13CCP-MAS固体核磁共振波谱法定性和定量研究EGCG对丝素蛋白构象转变的影响，以及EGCG对Zn2+诱导的丝素蛋白构象转变过程的干预。研究发现，EGCG可抑制丝素蛋白的构象转变，且随着EGCG浓度的增加，丝素蛋白样品中折叠态含量越少，当EGCG浓度增大到一定值，样品中折叠态含量不再随EGCG浓度的变化而变化。对于Zn2+诱导的丝素蛋白构象转变过程，EGCG具有抑制作用，当[EGCG]/[Zn2+]在0至1变化时，随着EGCG]/[Zn2+]比例的增加，样品中折叠态含量逐渐减少，当[EGCG]/[Zn2+]由1增大到2时，随着[EGCG]/[Zn2+]比例的增加，折叠态含量下降趋势变缓，当[EGCG]/[Zn2+]大于2时，样品中的折叠态含量保持一定值，不再随[EGCG]/[Zn2+]比例的变化而发生改变。我们认为，EGCG对Zn2+诱导的丝素蛋白构象转变过程的干预是通过络合Zn2+而发挥作用。
　　此外，我们利用MTT(3-(4，5-Dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazoliumbromide)细胞活性测试方法初步探索Zn2+对A53T PC12神经细胞存活率的影响以及EGCG的干预作用，结果表明，Zn2+具有细胞毒性作用，其细胞毒性具有剂量依赖性和时间依赖性，对于Zn2+诱导的细胞凋亡，EGCG具有抑制作用，且随着EGCG浓度的增大，其对细胞的保护作用越强。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

第一节 神经退行性疾病研究现状

1．1．1 神经退行性疾病定义

1．1．2 神经退行性疾病发病机制

1．1．3 金属离子与神经退行性疾病相关蛋白

1．1．4 神经退行性疾病治疗进展

1．1．5 茶多酚与神经退行性疾病

第二节 丝素蛋白研究现状

1．2．1 丝素蛋白与神经退行性疾病相关蛋白关联性

1．2．2 蚕丝蛋白结构、性质及组成

1．2．3 丝素蛋白构象转变过程

第三节 本课题研究背景、主要内容及意义

参考文献

第二章 EGCG对Zn2+诱导的丝素蛋白构象转变行为的干预

第一节 Zn2+对丝素蛋白构象转变的影响

2．1．1 样品制备

2．1．2 表征方法

2．1．3 实验结果

2．1．4 讨论

第二节 EGCG对丝素蛋白构象转变的影响

2．2．1 样品制备

2．2．2 表征方法

2．2．3 实验结果

2．2．4 讨论

第三节 EGCG对Zn2+诱导的丝素蛋白构象转变行为的干预

2．3．1 样品制备

2．3．2 表征方法

2．3．3 实验结果

2．3．4 讨论

第三节 小结

参考文献

第三章 Zn2+对A53T PC12神经细胞存活率的影响

第一节 引言

第二节 实验方法

3．2．1 实验材料和试剂

3．2．2 细胞培养

3．2．3 Zn2+对A53T PC12细胞存活率的影响

3．2．4 MTT细胞毒性分析

第三节 实验结果

第四节 讨论

参考文献

攻读硕士期间发表的论文

致谢