MicroRNA-145在大鼠颈动脉移植物血管病变中的表达及其调控平滑肌细胞表型变化的机制研究

摘要

本文主要从以下几部分进行了阐述：
　　第一部分 近交系大鼠颈动脉移植物血管病变模型的建立及评价
　　目的:通过近交系大鼠颈动脉移植建立移植物血管病变模型，评价该模型是否可以作为研究心脏移植物血管病变的动物模型。
　　方法:以Wistar大鼠作为供体，分别以Wistar大鼠和BN大鼠作为受体，进行颈动脉原位移植，一只供体动物的双侧颈动脉分别供给Wistar和BN大鼠。于移植后1周，4周，8周，16周采用高分辨率超声对移植动脉进行检测，观察新生内膜形成情况，之后处死动物取移植动脉，各时间点每组各6只。采用HE染色，Masson染色，免疫组化α-SMA，ki-67染色，免疫荧光α-SMA，ki-67双标染色及激光共聚焦成像，评价新生内膜的形成及细胞成分和增值状态。根据病理切片计算机图像处理结果和高分辨率超声数据计算狭窄率。
　　结果:手术成功率96％(48/50)，术后无感染，无死亡，5天后体重开始恢复。异基因移植4周后开始出现明显新生内膜形成，新生内膜随时间推移而增厚，到16周时管腔明显狭窄，新生内膜为均匀的同心圆样增厚。同基因移植16周时仅出现及少量新生内膜。高分辨率超声探测到的新生内膜变化趋势与病理切片一致。新生内膜免疫组化和免疫荧光染色均显示为大量α-SMA阳性细胞，较多ki-67阳性细胞，共聚焦显示新生内膜含有α-SMA、ki-67双阳性细胞。异基因移植组中膜α-SMA阳性细胞明显减少，中膜和外膜ki-67阳性细胞明显增多。计算机图像处理系统和高分辨率超声计算异基因移植组从4周开始各时间点的狭窄率分别为17.3％，37.6％，62.4％和13.2％，26.3％，42.0％。
　　结论:近交系大鼠颈动脉移植物血管病变的特点与CAV极为相似，新生内膜的主要细胞成分为平滑肌细胞且部分细胞处于增殖状态，中膜的平滑肌细胞去分化转变为合成型，向内膜迁移并增殖分化，形成新生内膜。该模型可以作为研究CAV的动物模型。
　　第二部分 MicroRNA-145在移植物血管病变中的表达及其调控平滑肌细胞表型变化的机制
　　目的:检测大鼠颈动脉移植物血管病变(allograft vasculopathy，AV)中microRNA-145的表达变化，探索AV病程中microRNA-145调控平滑肌细胞表型变化的机制。
　　方法:动物分为同基因移植组，异基因移植组和正常对照组。分别于移植后1周，4周，8周，16周处死动物，取移植动脉（正常对照取右侧颈动脉）和外周血。移植的两组每个时间点处死6只，正常对照4只。采用微量组织RNA提取试剂盒提取组织总RNA，采用血清RNA专用抽提试剂盒抽提血清中RNA。运用qRT-PCR技术，检测组织中microRNA-145，SRF，Myocardin，KLF4的表达变化，以及血清中microRNA-145的表达变化。
　　结果:移植1周后同基因组和异基因组microRNA-145表达显著下降，同基因组随后迅速回升，到16周时已恢复到正常对照的一半;而异基因组到4周时降到最低，之后缓慢恢复，到16周时仍显著低于正常，约为正常的1/40，同基因组的1/20。SRF与Myocardin的表达变化趋势与microRNA-145一致，随着SRF表达的上升，microRNA-145的表达也上升(r=0.887);随着microRNA-145表达的上升，Myocardin的表达也上升(r=0.996)，提示SRF可以促进microRNA-145的表达，而microRNA-145可以促进Myocardin的表达。KLF4的表达受到microRNA-145的抑制(r=-0.911)，随着microRNA-145表达的降低，KLF4表达升高，随着microRNA-145的表达升高，KLF4的表达降低。血清中microRNA-145的表达表现为移植后1周显著降低，4周后开始恢复，到16周时已恢复到正常水平。
　　结论:AV的过程中microRNA-145的表达显著降低。MicroRNA-145的表达受SRF调控，同时又通过与其靶基因如Myocardin，KLF4的形成调控网络，进而调节AV中平滑肌细胞表型变化。MicroRNA-145有望作为诊断和治疗AV的靶点。

目录

中英文缩略词表

摘要

引言

参考文献

第一部 近交系大鼠颈动脉移植物血管病变模型的建立及评价

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 MicroRNA-145在移植物血管病变中的表达及其调控平滑肌细胞表型变化的机制

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

论文综述 MicroRNA-145在调控平滑肌细胞表型变化中的研究进展

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