水环境中α-萘酚和β-萘酚的免疫检测方法的研究

摘要

酚类化合物是一种重要的化工原料。由于酚类物质有毒且难于降解，是一类重要的环境污染物，因此对环境中残留的酚类物质的检测非常必要。α—萘酚和β—萘酚广泛用于染料、香料、油脂、药物，橡胶和农药的合成与生产。两者常常共存于同一工业产品之中，因此建立测定α—萘酚和β—萘酚的分析方法对环境污染的控制有着重要意义。 目前测定萘酚异构体的方法主要有：气相色谱法，紫外分光光度法，高效液相色谱，毛细管电泳法，荧光光度法，磷光光度法，电化学方法。但是这些分析方法将待测污染物从样品中分离提取并去除杂质干扰的前处理过程十分复杂，操作费时，分析成本昂贵。免疫分析技术以其快速、灵敏度高、经济、样品处理简单等优点而成为21世纪最具竞争性和挑战性的监测分析技术。目前，免疫分析技术测定环境污染物在国内的报道较少。 本课题主要研究内容如下： (1)免疫原的制备：萘酚是小分子物质，不能直接免疫动物产生抗体，必需偶联大分子载体；且结构上不具备可与载体偶联的基团，因此首先要对α—萘酚和β—萘酚结构进行修饰。通过氯乙酸法在α—萘酚和β—萘酚分子中引入羧基基团，将萘酚改造为半抗原萘氧乙酸。采用活化酯法或混合酸酐法使半抗原分别与牛血清白蛋白或卵清蛋白偶联，合成了萘酚—BSA免疫原和萘酚—OVA包被原。对各偶联物进行紫外光谱扫描鉴定结构，并计算出半抗原与蛋白质结合比。(2)抗体的制备：将免疫原与适当的佐剂乳化后，免疫新西兰大白兔，以试管凝集试验和琼脂双向免疫扩散实验测定抗血清的效价。试管凝集试验中出现了凝集反应，琼脂双向免疫扩散试验中也出现了明显的沉淀线。将兔子体内获得的抗血清用辛酸—硫酸铵二步沉淀法、葡聚糖凝胶除盐及DEAE—纤维素精制提纯，得到纯化的α—萘酚和β—萘酚的多克隆抗体IgG。(3)免疫分析方法的建立：用制备的α—萘酚或β—萘酚包被原包被酶标板，以异硫氰酸荧光素为荧光探针，在优化荧光免疫反应条件后，建立了α—萘酚或β—萘酚抗原包被竞争荧光免疫分析新方法。用制备α—萘酚或β—萘酚抗体包被酶标板，以异硫氰酸荧光素为荧光探针，建立了α—萘酚或β—萘酚抗体包被荧光免疫分析新方法。这两种方法均具有检出限低，特异性好，线性范围宽的特点，用该方法测定了水环境中的α—萘酚或β—萘酚，结果令人满意。本论文建立了两种测定α—萘酚和β—萘酚的荧光免疫分析法，同时也为进一步建立其它免疫分析法检测环境中α—萘酚和β—萘酚的残留，提供了可靠的免疫原和抗体，在环境监测、防止污染和保护人体健康等方面具有重要意义。

目录

文摘

英文文摘

声明

1 前言

1.1酚类化合物概述及分析研究现状

1.2本实验研究对象的研究现状

1.2.1 α-萘酚和β-萘酚的理化性质及危害

1.2.2 α-萘酚和β-萘酚的检测研究现状

1.3免疫分析技术

1.3.1.免疫分析技术基本原理

1.3.2常用免疫分析技术

1.4本实验的研究目的和意义

1.5本实验的研究内容和技术路线

2 α-萘酚和β-萘酚半抗原和人工抗原的合成

2.1引言

2.2实验材料与仪器设备

2.2.1.实验材料

2.2.2仪器设备

2.3实验方法

2.3.1半抗原的合成与鉴定

2.3.2人工抗原的合成与鉴定

2.4实验结果与讨论

2.4.1.半抗原的鉴定

2.4.2人工抗原的鉴定

2.5本章小结

3抗体的制备

3.1引言

3.2实验材料与仪器设备

3.2.1实验材料

3.2.2仪器设备

3.3实验方法

3.3.1免疫阶段

3.3.2血清效价的测定

3.3.3采血

3.3.4抗体的纯化

3.4实验结果与讨论

3.4.1血清效价测定结果

3.4.2洗脱曲线的绘制

3.4.3纯化抗体的性质测定

3.5本章小结

4抗原包被竞争荧光免疫法测定α-萘酚

4.1引言

4.2实验材料与仪器设备

4.2.1实验材料

4.2.2仪器设备

4.3实验方法

4.3.1实验流程

4.3.2荧光免疫流程说明

4.3.3标准曲线的绘制

4.3.4交叉反应

4.3.5样品测定及回收实验

4.4实验结果与讨论

4.4.1荧光免疫条件优化实验

4.4.2标准曲线的绘制

4.4.3交叉反应实验结果

4.4.4样品测定及回收实验

4.5本章小结

5抗原包被竞争荧光免疫法测定β-萘酚

5.1引言

5.2实验材料与仪器设备

5.2.1实验材料

5.2.2仪器设备

5.3实验方法

5.3.1实验流程

5.3.2抗原包被荧光免疫分析工作条件的优化

5.3.3标准曲线的绘制

5.3.4交叉反应

5.3.5样品测定及回收实验

5.4实验结果与讨论

5.4.1抗原抗体最适工作浓度的选择

5.4.2标准曲线的绘制

5.4.3交叉反应实验结果

5.4.4样品测定及回收实验

5.5本章小结

6固相抗体包被荧光免疫法测定α-萘酚

6.1引言

6.2实验材料与仪器设备

6.2.1实验材料

6.2.2仪器设备

6.3实验方法

6.3.1实验流程

6.3.2抗体包被荧光免疫分析工作条件的优化

6.3.3标准曲线的绘制

6.3.4交叉反应

6.3.5样品测定及回收实验

6.4实验结果与讨论

6.4.1优化实验结果与讨论

6.4.2标准曲线的绘制

6.4.3交叉反应实验结果

6.4.4样品测定及回收实验

6.5本章小结

7固相抗体包被荧光免疫法测定β-萘酚

7.1引言

7.2实验材料与仪器设备

7.2.1实验材料

7.2.2仪器设备

7.3实验方法

7.3.1实验流程

7.3.2抗体包被荧光免疫分析工作条件的优化

7.3.3标准曲线的绘制

7.3.4交叉反应

7.3.5样品测定及回收实验

7.4实验结果与讨论

7.4.1优化实验结果与讨论

7.4.2标准曲线的绘制

7.4.3交叉反应实验结果

7.4.4样品测定及回收实验

7.5本章小结

8总结与展望

8.1本实验的研究内容和取得的成果

8.2问题和思考

8.3前景与展望

参考文献

硕士期间发表文章

致谢