食管癌细胞体外培养药敏试验和海绵总萜烯对食管癌抗癌作用的研究

摘要

目的： 本试验应用四甲基偶氮唑盐染色法（tetrazolium dye,MTT）研究不同食管癌患者对常用化疗药物及化疗方案的药物敏感性，P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-pg）及肺耐药相关蛋白（Lung resistant-related protein, LRP）的表达及其与食管癌临床病期、组织分化程度、药敏试验结果的相关性，探讨不同食管癌患者对药物的敏感性，为食管癌的临床化疗提供个体化用药的实验室依据。研究海绵总萜烯（AGH）单独用药和联合用药对食管癌细胞的敏感性和其对食管癌细胞凋亡及细胞周期的影响。 方法： 选取手术切除的新鲜食管癌组织标本，进行体外原代细胞培养，选用海绵总萜烯与食管癌化疗常用的药物及化疗方案进行肿瘤细胞药物敏感试验，同时应用免疫组织化学方法检测食管癌细胞P-糖蛋白及肺耐药相关蛋白的表达情况，应用流式细胞术检测海绵总萜烯作用后食管癌细胞的凋亡及细胞周期的变化。 结果： 共取手术标本76例，培养成功58例，失败18例，成功率76.3％（58／70）。单一用药组间敏感率不同（P＜0.05），各单药间经两两比较证实海绵总萜烯和紫杉醇抑制率无显著差别（P＞0．05），其他三种化疗药与海绵总萜烯相比差别有显著性（P＜0.05）。单药对食管癌细胞的敏感性与肿瘤临床病期无明显相关性（P＞0.05），与组织分化程度有关（P＜0.05），随食管癌组织分化程度的减低，单药敏感性升高。联合用药对58例食管癌细胞的抑制率均大于单用药，海绵总萜烯和其他化疗药联合应用的抑制率以海绵总萜烯联合顺铂和海绵总萜烯联合紫杉醇效果好，而临床常用的化疗方案中以紫杉醇联合顺铂效果最好，其次为顺铂联合长春瑞滨、顺铂联合5-氟脲嘧啶。 食管癌为P-gp高表达肿瘤，阳性率为69％（40／58），且多为“＋＋～＋＋＋”，阳性染色多位于胞浆或胞膜，LRP在食管癌中表达率也较高，总阳性率为58.6％（34／58）。P-gp、LRP表达程度与食管癌临床病期、组织分化程度无明显相关性（P＜0.05）。研究各用药组的药物敏感性和免疫组化染色结果显示海绵总萜烯的敏感性与P-gp、LRP表达程度均无明显相关（P＞0.05），顺铂的敏感性与P-gp表达程度无关（P＞0.05），与LRP表达的强弱有关（P＜0.05），长春瑞滨、紫杉醇的敏感性均与P-gp和LRP表达的程度有关（P＜0.05），5-氟脲嘧啶与P-gp、LRP的表达程度无关（P＞0.05）。 海绵总萜烯对食管癌细胞有明显的抑制作用，可引起细胞凋亡，海绵总萜烯作用食管癌细胞12小时开始出现凋亡，作用48小时出现最大凋亡峰，48小时内细胞凋亡指数随药物作用时间的延长而增加，呈现一定的时间效应关系。海绵总萜烯对食管癌细胞周期的影响不明显（P＞0.05）。 结论： 1．人食管癌细胞原代培养MTT药敏试验成功的关键是取材，取材时应在边缘部位多点取材，尽量剔除非肿瘤组织，避免污染。 2．几种常用化疗药物体外药敏试验的敏感顺序为紫杉醇、长春瑞滨、顺铂、5-氟脲嘧啶，联合用药敏感性顺序为顺铂联合紫杉醇、顺铂联合长春瑞滨、顺铂联合5-氟脲嘧啶，此结果与临床化疗疗效相近。采用食管癌体外药敏试验能筛选出对每个病人的敏感药物，指导肿瘤病人的个体化用药。 3．食管癌是P-gp和LRP高表达组织，其表达程度与食管癌临床病期、组织分化程度无关。P-gp和LRP的表达与部分化疗药物的耐药存在相关性，对于指导临床个体化用药的选择提供依据。 4．海绵总萜烯对食管癌有显著的细胞毒作用，可引起细胞凋亡，具有良好的潜在的临床应用价值。

目录

符号说明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图表

参考文献

综述 海绵动物抗肿瘤活性物质研究进展

致谢

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