bFGF联合骨髓间充质干细胞促进周围神经再生的实验研究

摘要

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子联合骨髓间充质干细胞诱导周围神经再生的作用，为临床遇到的周围神经缺损病例寻找一种方便可行的修复方法。 材料与方法： 1.MSCs的采集、培养 Wistar大鼠1只，氯胺酮麻醉后，无菌条件下切开双大腿外侧皮肤，剥离取出股骨，用含肝素钠生理盐水反复冲洗骨髓腔，冲洗液移入试管内，混匀，离心，用D-Hanks平衡盐溶液洗2次，再离心，加入基础培养液接种于培养瓶，放置37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度孵箱中培养。三天更换培养液，去除未贴壁的细胞，以后每3d换液一次，待细胞长满培养瓶底部后用胰蛋白酶消化，再加入有血清培养液终止消化，然后加入适量培养液计数，分别接种在新的培养瓶内。计数MSCs达所需数量时(大于2×107个)，将细胞放入液氮中保存待用。 2.动物实验 Wistar大鼠30只，均为雄性，体重200g左右，随机分成A、B、C 3组，每组10只。氯胺酮腹腔麻醉后，无菌条件下手术，显露左下肢坐骨神经，在梨状肌下缘3 mm处切除长约6 mm的坐骨神经干，任其自然回缩。手术显微镜下将神经两断端分别套人硅胶管两端内1.0 mm，8/0无创缝合线缝合神经外膜和硅胶管壁，使神经两断端在硅胶管内相距10 mm。A组：将MSCs+bFGF溶液(浓度约2×107/ml)注入硅胶管内；B组：将MSCs溶液(浓度约2×107/ml)注入硅胶管内；C组：硅胶管内注满生理盐水：三组分别用纤维蛋白凝胶封闭接口处，缝合创口。 结果： 1.大体观察：MSCs+bFGF组仅1只大鼠实验侧肢体足底水肿并溃疡形成，其余两组术后多数大鼠出现轻重不等的水肿及溃疡形成甚至足趾部分缺损；术后8周和12周显露神经断端，观察MSCs+bFGF组和MSCs组硅胶管内见再生神经通过；生理盐水组8周和12周均见硅胶管内充满淡黄色的液体，无再生神经通过。 2.通过检测骨神经指数(SFI)、腓肠肌肌电图、小腿三头肌湿重、再生神经纤维组织学切片检查以及图像分析，结果采用SPSS 13.0进行数据处理，行单因素方差分析及t检验，P<0.05为有统计学意义，分析显示：8周和12周时，MSCs+bFGF组神经功能恢复优于MSCs组，MSCs+bFGF、MSCs两组各项指标均明显优于生理盐水组，但与健侧神经相比有显著性差异。 结论： (1)实验证实了骨髓间充质干细胞(MSCs)可以促进周围神经再生。 (2)硅胶管可以作为神经组织工程良好的人工支架材料。 (3)骨髓间充质干细胞(MSCs)可以作为周围神经组织工程的种子细胞，并且复合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后能更好的修复神经缺损。

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前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

综述 组织工程与周围神经再生的研究进展

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