DNA免疫激活序列特异性结合蛋白的研究

摘要

DNA免疫激活序列(immunostimulatorysequence,ISS)是发现于细菌DNA中的一些以未甲基化的CpG二核苷酸对为核心的具有免疫激活功能的核苷酸序列.该项研究试图通过筛选免疫细胞内的ISS特异性的DNA结合蛋白来鉴定ISS的特异性受体,以为进一步探讨ISS的分子作用机制奠定实验基础.为此,我们采用酵母单杂交系统筛选了人骨髓cDNA文库,从中获得了4个阳性克隆,序列分析表明其中两个编码抗体的轻链,分别与抗DNA抗体和抗乙肝表面抗原抗体(HBsAb)同源,提示包括HBsAb在内的某些抗体可选择性地与ISS结合.为提供进一步的实验依据,我们进而以ELISA方法分析了多种抗体与质粒DNA之间的相互作用.由于已证明DNA激活免疫细胞时必须首先被吞入内体(Endosome)中,而且内体的酸化为其免疫激活作用所必需,所以我们在ELISA实验中比较了在不同pH条件下抗体与DNA的相互作用.

目录

缩略词表

前言

材料和方法

1.以ISS为诱饵的酵母单杂交系统的建立及人骨髓cDNA文库的筛选

2.以酶联免疫吸附试验（BLISA）分析在不同PH条件下抗体与质粒DNA的相互作用

3.用电泳迁移率改变检测法(EMSA)分析抗体与寡聚核苷酸的相互作用

结果

1.以ISS为诱饵的酵母单杂交系统的建立

2.ISS特异性结合蛋白的克隆

3.质粒DNA与HBsAb的相互作用具有pH依赖性并受ISS调控

4.其他抗体与质粒DNA的相互作用与HBsAb相似

5.ISS与多种抗体之间相互作用的EMSA检测结果

讨论

小结

参考文献

文献综述——DNA的免疫激活作用

1.DNA免疫激活作用的结构基础——免疫激活序列(ISS)

2.DNA免疫激活作用的细胞机制

3.ISS的分子作用机制

4.应用基础研究

5.结束语

6.参考文献

博士期间发表的论文

致谢

附录