增强DNA疫苗免疫效果的策略研究

摘要

核酸疫苗是90年代兴起的新型疫苗,已在多种疾病的防治中显示出巨大的潜能.然而核酸疫苗是一个新生事物,目前还存在许多尚未解决的问题,如核酸疫苗的免疫效果在不同动物个体中差异较大,有些疫苗在小个体的动物免疫保护效果较好,而在大个体动物中,效果较差.该实验就针对这个问题,采用几种策略对DNA疫苗的免疫效果进行调节:(1)候选抗原基因的筛选 该研究中分别选择了寄生虫和细菌感染性疾病作为研究对象,一种是囊虫病,一种是结核病.在筛选囊虫病候选抗原基因的过程中,该研究比较了cC1和AgB核酸疫苗在仔猪中的免疫保护效果,结果表明cC1核酸疫苗诱发的保护率高于AgB核酸疫苗.然后,我们对cC1核酸疫苗的免疫保护机制进行了探讨,发现cC1核酸疫苗是通过使囊尾蚴细胞发生凋亡来产生保护作用的.在结核病候选抗原的筛选中,我们研究了ESAT6、MPT64、AgB5A、HSP65四种核酸疫苗在小鼠中诱导的免疫应答.(2)针对疾病保护性免疫的特点选用合适的佐剂 该研究选用了泛素(Ubiquitin,UbR)作为免疫调节剂,发现泛素分子能够增强四种核核酸疫苗诱导的细胞免疫应答.(3)免疫接种组合形式的探索 该实验将ESAT6 DNA疫苗和大肠杆菌表达的ESAT6蛋白联合应用,采用DNA prime-protein boost的方案.来观察DNA疫苗免疫应答的变化,结果表明该种方案增强了ESAT6 DNA疫苗诱导的细胞免疫和体液免疫,但并没有改变DNA疫苗诱导的初始免疫类型.(4)探讨接头序列在构建表位DNA疫苗中的影响 该研究根据已报道的结核抗原和表位,选用了MPT64和38kDa抗原各自的一个CTL表位,构建表位DNA疫苗,进行了接头序列(AAY)对这两种表位疫苗呈递影响的研究.结果发现,AAY接头序列提高了MPT64抗原表位的呈递,而没有显著影响38kDa抗原表位的呈递.这提示接头序列对CTL表位的呈递是有影响的.

目录

英文缩写词表

前 言

第一章文献综述

一、结核病的概况

二、目前在研疫苗的研究

三、结核杆菌保护性抗原的选择

四、评价免疫保护力的动物模型

五、展望

参考文献

第二章实验材料与方法

1、材料

2、方法

第三章候选抗原基因的筛选

引 言

1.结 果

1.1cC1蛋白在大肠杆菌中获得了表达

1.2cC1蛋白免疫新西兰白兔获得了高效价的特异性抗体

1.3cC1的定位研究

1.4cC1和AgB DNA疫苗仔猪获得了一定的保护率

1.5cC1 DNA疫苗使仔猪获得保护性免疫的可能的机制

1.6结核杆菌的培养

1.7结核抗原基因PCR产物电泳鉴定

1.8pVAX-结核抗原重组子的构建、建定及序列分析

1.9pVAX-ESAT6，MPT64，Ag85A，ASP65重组质粒在小鼠肌肉细胞中的表达

1.10原核表达质粒pGEX5T-四种抗原组质粒的构建与鉴定

1.10融合蛋白GST-结核抗原在大肠杆菌中的表达及鉴定

1.11结核杆菌ESAT6、MPT64、Ag85A、HSP65 DNA疫苗的免疫原性研究

2.讨 论

参考文献

第四章有效佐剂的选用

引 言

参考文献

第五章免疫接种组合的探索

2.讨论

参考文献

第六章接头序列在表位DNA疫苗构建中的应用

引 言

2.讨论

参考文献

附 录

总 结

在读期间发表论文情况

致谢

附文