英文缩略词表
引言
第一部分 T7RNA聚合酶介导的RNA干扰体外转录体系的建立及癌基因p28GANK RNAi特异性靶位点的筛选
前言
试剂和仪器
1主要化学药品和生物试剂
2主要试剂的配制（主要参照分子实验克隆指南，第二版）
3主要仪器
4 DNA模板的合成
实验方法
1 RNAi的T7体外转录体系的建立及验证
2细胞培养
3脂质体Lipofectamine PlusTM转染
4 Western blot上样液制备
5 Western blot操作步骤（以检测GFP为例）
6细胞RNA的抽提步骤
7 Real-Time PCR操作步骤
实验结果
1 T7RNA聚合酶介导的RNA干扰体外转录体系的建立及验证
2癌基因p28GANK RNA干扰靶位点的筛选与鉴定
3癌基因p28GANK在肝癌细胞中表达鉴定及对其RNAi作用
讨论
1应用RNAi技术对癌基因p28GANK研究的必要性
2 RNAi的T7体外转录体系的建立及验证
3癌基因p28GANK RNAi靶位点的筛选及鉴定
第二部分腺病毒介导的RNA干扰对癌基因p28GANK细胞生物学功能影响的研究
前言
试剂和仪器（所用试剂和仪器与第一部分相同则省略）
1主要化学药品、生物试剂和仪器
2 DNA克隆片段合成
实验方法
1细胞培养
2腺病毒载体的构建、测序、包装、测滴度、PCR鉴定及转染方法
3 MTT操作步骤
4细胞流式分析
5免疫组化(肝癌细胞爬片，DAPI,CY3)
6免疫组化TUNEL分析（肝癌细胞RNAi96hr后）
7细胞集落形成实验(Colony-forming Assay)
8 p28GANK RNAi后的裸鼠荷瘤实验
实验结果
1腺病毒包装、PCR鉴定、扩增和滴度测定
2肝癌细胞p28GANK基因RNAi后Western blot和Real-Time PCR结果
3癌基因p28GANK RNAi后对五种肝癌细胞增殖能力的影响
4流式细胞仪分析p28GANK RNAi后对肝癌细胞细胞周期的影响
5免疫组化(CY3,DAPI)结果
6免疫组化TUNEL分析
7癌基因p28GANK RNAi对肝癌细胞SMMC-7721克隆形成的影响
8癌基因p28GANK RNAi对肝癌细胞SMMC-7721的裸鼠荷瘤的影响
讨论
第三部分RNA干扰癌基因p28GANK对其参与CDK4-CycD1-E2F-Rb1信号转导通路作用的研究
前言
试剂和材料（所用试剂和仪器与第一部分相同则省略）
1主要化学药品、生物试剂和仪器
2主要试剂配制
实验方法
1细胞培养
2双荧光素酶报告基因分析
3 BrdU分析操作步骤
4蛋白质双向电泳分析
实验结果
1 RNA干扰癌基因p28GANK，对肝癌细胞内其它相关蛋白表达的影响
2双荧光素酶报告系统分析核转录因子E2F和NF-kB的转录活性的变化
3 BrdU分析肝癌细胞RNAi后DNA合成速率的变化
4蛋白质双向电泳分析
讨论
小 结
参考文献
致 谢
附录一文献综述(一):RNA干扰（RNA interference,RNAi）
附录一文献综述(二)：腺病毒
附录二博士期间参与的工作及形成的论文
