新型纳米基因转移系统体外转染兔关节软骨细胞的研究

摘要

利用低分子量壳聚糖制备一种新型载基因纳米微粒，作为基因转移系统，表征其理化性质，检测其生物学特性，并评估其体外转染软骨细胞的性能。 方法以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒及β-半乳糖酐酶(β-Galactosidase)质粒作为报告基因，通过分子自组装的方法制备载基因纳米壳聚糖微粒。以透射电镜(TEM)和原子力显微镜(AFM)观察微粒的形态，以激光粒径分析仪测定其粒径和表面的Zeta电位，行DNaseⅠ酶切保护实验研究壳聚糖对质粒DNA的保护作用，行MTT试验研究纳米微粒对细胞的毒性作用，于体外进行转染试验观察其对软骨细胞的转染活性。 结果壳聚糖可以和GFP质粒相互作用形成带有表面正电荷的纳米微粒，能在很大程度上保护质粒DNA不受DNaseⅠ的降解，对细胞的毒性小，转染软骨细胞后基因能够有效表达。 结论载基因低分子量壳聚糖纳米微粒能够有效地转染软骨细胞，是一个很有潜力的纳米局部传输系统(NanometerLocalDeliverySystem，NLDS)。

目录

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第一部分概述

一、纳米基因转移系统的基本理论

二、研究背景

三、研究目的、意义、思路、步骤及内容

第二部分纳米基因转移系统的制备和表征

第三部分兔关节软骨细胞的分离培养与冻存复苏

第四部分载基因低分子量壳聚糖纳米微粒体外转染特性研究

第五部分讨论

致谢

文献综述一 关节软骨组织工程修复的种子细胞

文献综述二 关节软骨组织工程修复的支架材料