DJ-1和PTEN在慢性肾脏病肾小管间质病变中的表达及意义

摘要

目的:
　　 慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的发病率每年都以7％的速度增加,其最终结局将发展为终末期肾脏病(end stage renal disease,ESRD)。很多研究都集中在肾小球硬化、纤维化等病变上,不可忽略的是肾小管间质病变在肾功能的进行性损害过程中也起到了非常重要的作用。因此在积极治疗肾小球病变的同时如何延缓甚至阻止肾小管间质病变的发展成了慢性肾脏病治疗的又一主题。本实验旨在研究促纤维化因子重组人帕金森病蛋白7(Parkinson'sdisease7,Park7,DJ-1)和抗纤维化因子染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在原发性慢性肾脏病患者肾组织中的表达及意义。分析其表达相关性,并通过分析二者与临床、实验室指标、肾脏病理改变的关系,初步探讨DJ-1、PTEN在CKD肾小管间质病变中的作用,为慢性肾脏病的发病机制及治疗提供有力证据。
　　 方法:
　　 选择2010年12月至2011年4月期间就诊于济南军区总医院肾内科、并通过肾活检(光镜、免疫荧光、电镜)和临床资料确诊的原发性慢性肾脏病患者45例,其中男性25例,女性20例。具体临床诊断包括慢性肾炎30例、肾病综合征12例、隐匿性肾小球肾炎3例。排除继发性慢性肾脏病:糖尿病肾病、紫癜性肾炎、乙肝相关性肾炎、狼疮性肾炎、淀粉样变肾病、药物性肾损害等。收集患者一般情况:平均年龄、平均病程。观察并记录患者肾活检术前各项临床指标:收缩压、舒张压、血红蛋白、24小时尿蛋白定量、血清白蛋白、血清球蛋白、胆固醇、甘油三酯、肌酐、尿素氮、血尿酸、尿比重、尿渗透压等,并用简化MDRD公式[1]估测患者的肾小球滤过率(GFR)。患者肾活检组织分成三部分,一部分做冰冻切片,在IgA、IgG、IgM、C3、C1q、FRA、HBsAg、HbcAg等免疫荧光染色的基础上,行DJ-1、PTEN两因子免疫荧光染色。采用免疫荧光三步法检测DJ-1(FITC标记)、PTEN(Cy3标记)在肾组织中的表达,并用图像分析软件(青岛美迪新技术公司)对免疫荧光强度表达做平均值半定量。一部分做石蜡切片,常规行苏木素-伊红(HE)、高碘酸.席夫氏(PAS)、六胺银(PASM)、MASSON三色染色,观察光镜下肾组织病理改变。另有部分组织行电镜检查。根据世界卫生组织(WHO1995年)肾脏病组织学分类标准进行病理分型。肾小管各项病理参数的半定量积分采用Katafuchi等[2]的标准分级。根据肾小管间质损害程度分为Ⅰ组(0分);Ⅱ组(1-3分);Ⅲ组(4-6分)和Ⅳ组(7-9分)。采用SPSS13.0统计软件对资料进行统计学处理、分析,检测结果以(x)±s表示,P＜0.05为差异有统计学意义。
　　 结果:
　　 1、患者平均年龄(43.37±15.72)岁,平均病程(19.65±33.83)月,平均收缩压(133.17±21.75)mmHg,平均舒张压(85.17±11.33)mmHg,肾小管积分(3.667±2.63),肾小球滤过率(75.71±50.68),血肌酐(169.10±85.34),尿素氮(8.31±5.46),血尿酸(354.23±127.98),血清白蛋白(31.11±9.007),血清球蛋白(26.24±7.03),胆固醇(6.57±2.62),甘油三酯(2.24±1.18),血红蛋白(125.20±20.66),尿比重(1.0163±0.0126),尿渗透压(689.33±235.76),24小时尿蛋白定量(4.60±6.23)。
　　 2、45例患者肾脏病理分型包括:1)系膜增生性肾小球肾炎20例:轻度6例、中度11例、重度3例;2)膜性肾病6例:Ⅰ期1例、Ⅱ期3例、Ⅲ期2例;3)IgA肾病12例:Ⅱ级1例、Ⅲ级3例、Ⅳ级5例、Ⅴ级3例;4)局灶节段性肾小球硬化症3例;5)膜增生性肾小球肾炎4例。肾小管间质积分(3.667±2.63),根据积分分成4组:Ⅰ组(9例);Ⅱ组(15例);Ⅲ组(11例)和Ⅳ组(10例)。
　　 3、DJ-1在4组患者肾组织中主要表达于肾小管上皮细胞胞浆,并随着肾小管间质病变程度的加重表达量逐渐增多,组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。与肾小球滤过率、尿渗透压呈负相关(P＜0.05);与患者肾小管间质病变积分、血肌酐、尿素氮呈正相关(P＜0.05)。
　　 4、PTEN在Ⅰ组患者肾组织中广泛、大量表达于肾小管上皮细胞胞浆,但随着肾小管间质病交程度的加重,在其余3组表达量逐渐减少,组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。并且与肾小球滤过率、尿渗透压成正相关(P＜0.05);与肾小管间质病变积分、血肌酐、尿素氮之间存在明显负相关(P＜0.05)。
　　 5、DJ-1、PTEN二者在各组患者肾组织中的表达量呈相反趋势,统计学分析呈显著负相关(r=-0.823,P＜0.01)。
　　 结论:
　　 1、DJ-1在各组原发性慢性肾脏病患者肾组织中有不同程度的表达,随着肾小管间质纤维化程度的加重而表达增多,组间差异有统计学意义。并与肾小球滤过率、尿渗透压呈显著负相关,与肾小管积分、血肌酐呈显著正相关。提示DJ-1与肾脏纤维化密切相关,可能存在促肾小管间质纤维化作用。
　　 2、PTEN在各组原发性慢性肾脏病患者肾组织中有不同程度的表达,随着肾小管间质纤维化程度的加重而表达减少,组间差异有统计学意义。与肾小球滤过率、尿渗透压呈显著正相关,与肾小管积分、血肌酐呈显著负相关。提示PTEN与肾脏纤维化密切相关,可能存在抑制肾小管间质纤维化作用。
　　 3、DJ-1与PTEN在肾组织中的表达呈现负相关,由于二者均能作用于PI3K-Akt通路,并且是一对矛盾体,提示DJ-1可能在肾脏纤维化过程中负向调节PTEN的表达,促使肾脏纤维化。