RNA干扰抑制HepG-2细胞DNA-PKcs基因表达对放射敏感性影响的实验研究

摘要

本课题在前人研究的基础上，构建细胞稳定表达siRNA的实验技术平台，在mRNA、蛋白质水平观察其对人肝癌细胞株HepG-2DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs表达的抑制作用，并在细胞水平观察其放射敏感性的影响，从而探讨稳定表达siRNA抑制DNA-PKcs基因表达对HepG-2细胞放射敏感性的影响，为肿瘤的放射增敏研究提供一条新的思路，同时进一步探讨DSB修复的作用机制。本课题选择人肝癌细胞株HepG-2DSB修复基因DNA-PKcs作为靶基因，根据文献中证实针对DNA-PKcs基因有效的siRNA，合成63-64nt的寡核苷酸，经过退火与经BamHⅠ和HindⅢ酶切的线性化质粒pSilencer2.1-U6定向连接，转化大肠杆菌DH5α。连接成功的质粒分别命名为pSilencer-1、pSilencer-2。另以AMBION公司的错乱序列作为阴性对照，命名为pSilencer-C。这些质粒均经过PCR和测序鉴定。

目录

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缩略简称

前言

第一部分 siRNA表达载体pSilencer-2.1的构建

材料

方法

实验结果

讨论

第二部分 稳定表达siRNA细胞的筛选

材料

方法

实验结果

讨论

第三部分 RNAi抑制DNA-PKcs基因表达对肿瘤辐射敏感性的影响

材料

方法

结果

讨论

总结

参考文献

哺乳动物细胞DNA双链断裂修复机制研究进展

DNA双链断裂修复抑制与放射增敏

在校期间发表论文

致谢