RNA干扰抑制RAD51基因表达对放射敏感性影响的实验研究

摘要

目的:构建针对DNA双链断裂修复基因RAD51的siRNA表达质粒,观察对肝癌细胞株HepG-2放射敏感性的影响。方法:采用基因重组技术,构建针对RAD51基因的干扰质粒pSilencer-1、pSilencer-2、pSilencer-3及对照质粒pSilencer-C,经脂质体转染HepG-2细胞,200μg／mL潮霉素筛选稳定表达的细胞,用Western blot测定RAD51蛋白表达量的改变,用细胞克隆形成实验测定细胞放射敏感性。结果:筛选出稳定转染各组质粒的细胞;转染pSilencer -1、pSilencer-2和pSilencer-3质粒细胞克隆的RAD51蛋白表达量分别为转染pSilencer-C细胞克隆的0．60±0．29、0．36±0．16和0．15±0．09,t值分别为4．101、6．561和8．714,P值分别为0．049、0．003和0．001。pSilencer-C组、pSilencer-2组和pSilencer-3组三组剂量存活曲线的D0值分别为1．55、1．46和1．44,Dq值分别为3．31、3．16和2．82,SF2分别为0．82、0．73和0．67 Gy;与pSilencer-C组相比,pSilencer-2组和pSilencer-3组在2 Gy剂量时的放射增敏比SERSF2分别为1．12和1．23。结论:RNAi抑制RAD51基因的表达,能提高HepG-2细胞的放射敏感性,提示RAD51基因可作为放射增敏治疗的一个潜在靶点。