δ-阿片肽对猪体外循环后肺再灌注损伤影响的实验研究

摘要

体外循环或肺移植术后肺损伤是临床关注的重要课题，其中肺缺血再灌注损伤是导致术后呼吸功能下降甚至呼吸功能衰竭的许多因素中的主要原因之一，这也影响了手术的效果，甚至威胁病人的生命安全。尤其是随着体外循环和肺移植术的进展，肺缺血再灌注损伤越来越受到临床医生的极大关注。 1986年，国外学者发现IPC能够对不同器官缺血再灌注损伤提供保护作用，直到1995年才有研究发现阿片肽是IPC的有益介质。阿片肽能模拟IPC的作用，而IPC的作用能被阿片受体的阻滞剂所阻断。因此在IPC在临床使用受限的情况下，通过采用阿片肽预处理，来达到IPC相同效果引起研究人员的关注。 [目的]本实验研究阿片受体和它的激动剂DADLE(一种δ-阿片受体激动剂)在体外循环后肺缺血再灌注损伤中的作用，同时探讨它的可能机制，以及与ATP敏感钾通道阻滞剂之间的关系。 [材料和方法]35只健康雄性上海白猪，3-4个月龄，重25-35Kg.术前禁食12小时，术前1小时肌肉注射阿托品0.5mg，采用3％戊巴比妥3～5mg/Kg静脉麻醉后，气管切开，接动物用小型呼吸机机械通气。VT15～20ml·Kg-1，RR16bpm，FiO2100％。右股动脉插管备血气监测和抽取血标本，按常规建立体外循环。体外循环时间平均控制在110分钟，但肺缺血时间(体外转流且心跳停止的时间)严格控制在60分钟。肺再灌注时间(体外转流停止，心跳恢复的时间)也严格控制在60分钟。围体外循环期ABP控制在90mmHg，体温控制在36-38℃。 所有动物随机分为五组，每组七只：假手术组(shamoperationS组)、体外循环模型组(CPB，C组)、DADLE预处理组(D组)、术前24小时和48小时两次DADLE预处理组(T组)、glibenclamide和DADLE同时预处理组(G组)。S组只开胸和进行插管操作，不进行体外转流也不给予任何预处理；C组只建立体外循环和体外转流，但不予任何药物预处理；D组建立体外循环之前1h给予静脉注射DADLE1mg/Kg，建立体外循环模型同上.T组建立体外循环之前24h和48h两次给予静脉注射DADLE1mg/Kg，建立体外循环模型同上，G组在建立体外循环前一小时同时给予Glibenclamide和DADLE各img/Kg，其余同上。所有组均予以ABP、PIP、ECG、MPA心功能监测并记录结果。于体外循环前、再灌注10分钟、30分钟、60分钟采集动脉血标本(相当于肺静脉血)离心取上清测MDA(maloudialdehyde)，相同时点采集右股动脉血作血气分析监测。于再灌注60分钟，取肺组织制作光镜和电镜标本以备光镜形态学和肺泡上皮超微结构观察，并于光镜下行LTD分析。于体外循环前和再灌注60分钟两点个时取肺组织作W/D测定。 [结果]1.PIP：转流前各组间及组内PIP之间并无显著性差异。再灌注后，D组、T组PIP较体外循环前轻微升高但无统计学意义(p＞0.05)，C组、G组PIP较体外循环前明显升高(p＜0.05)，体外循环后C组、G组PIP升高明显大于D组、T组、S组。(p＜0.05)。 2.MDA：体外循环后S组MDA无变化，其余四组MDA体外循环后均呈升高趋势。其中C组体外循环后MDA显著升高(p＜0.05)，D组、T组使用DADLE使MDA的升高程度明显降低，与C组之间差异显著(p＜0.05)，G组合用Glibenclamide后MDA较D组升高明显(p＜0.05)。 3.PaO2：在基础状态及体外循环前各组间及组内PaO2相比无显著性差异(p＞0.05)。体外循环后再灌注60mins，C组、G组PaO2明显降低，DADLE的使用使PaO2的下降得到明显改善，D组、T组PaO2显著高于C组、G组(p＜0.05)，且术前24h给药和术前1h给药具有相同作用。S组PaO2前后无显著变化(p＞0.05)。 4.转流前各组W/D值之间无显著性差异(p＞0.05)，再灌注60mins后C组W/D值升高显著高于S组，DADLE预处理后的D组、T组的W/D值升高明显低于C组(p＜0.05)，G组虽也使用DADLE预处理，但同时伍用了Glibenclamide，W/D值升高显著高于D组、T组。 5.形态学和肺泡上皮超微结构体外循环后C组光镜下观察见肺泡间有炎性细胞浸润，肺泡间隔增宽，肺泡腔有渗出液、炎性细胞和红细胞渗出，毛细血管充血。电镜下观察见肺泡Ⅰ型上皮细胞肿胀，肺泡Ⅱ型上皮细胞胞浆疏松，线粒体肿胀部分嵴消失，板层小体数目减少，排空增多。DADLE预处理后，D组、T组光镜下形态学和电镜下肺泡上皮超微结构改变明显轻于C组、G组。其中S组几无形态学改变。 6.LTD体外循环后C组、G组、D组、T组LTD明显大于S组(p＜0.05)，D组、T组显著小于C组、G组(p＜0.05)，D组、T组之间，C组、G组之间均无显著性差异(p＞0.05)。 [结论](1)DADLE的应用可以降低猪体外循环期间肺缺血再灌注损伤引起的肺微血管通透性的增加，减轻肺组织的脂质过氧化反应，对体外循环期间的肺损伤具有一定的保护作用。(2)DADLE对猪体外循环期间的肺损伤具有一定的保护作用，可能与体外循环后肺再灌注过程中抑制中性粒细胞在肺内黏附和聚集，减少了肺再灌注损伤过程中氧自由基的产生，减轻氧自由基对肺脂质的过氧化密切相关。(3)DADLE预处理24h后仍能够减轻体外循环后肺损伤，提示DADLE对肺也存在后时相保护作用。(4)KATP敏感钾通道阻断剂(glibenclamide)和DADLE同时预处理后，DADLE的这种肺保护作用被glibenclamide阻断，提示DADLE是通过KATP敏感钾通道的开放产生保护作用。

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结果

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电镜照片

讨论

阿片肽对缺血再灌注损伤影响的研究

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