可卡因—安非他明调节转录肽抗体对抗吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱

摘要

目的：研究可卡因—安非他明调节转录肽(cocaine-amphetamine-regulatedtranscript，CART)抗体在吗啡依赖和复吸中的作用。 方法：用分子生物学的技术克隆将CART55-102序列克隆到pGEX-4T3原核表达载体多克隆位点，构建GST—CART55-102融合表达载体。在原核细胞中表达并纯化融合蛋白GST—CART55-102，免疫学方法制备CART55-102多克隆抗体，用亲和层析技术纯化CART55-102抗体，蛋白印记技术鉴定亲和层析纯化抗体的特异性，用行为学方法分别观察纯化后兔源性CART55-102抗体对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的影响。 结果：GST—CART55-102在大肠杆菌中能以上清的形式大量表达，并能用GST亲和层析方法获得纯度大于90％的GST—CART55-102。商业化CART单抗可识别该融合蛋白，表明该融合蛋白具有CART单抗所识别的抗原表位。Westernblot显示用该融合蛋白制备并用亲和层析技术纯化的兔源性CART55-102抗体的能特异性识别CART55-102，行为学结果显示，每日吗啡训练前两小时静脉注射CART55-102抗体(2mg/kg，4mg/kg)，能抑制在吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的形成；吗啡训练完成后(连续训练7天)，单次静脉注射CART55-102抗体(2mg/kg，4mg/kg，8mg/kg)能明显改变吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的行为(P＜0.05，P＜0.01及P＜0.01)；吗啡训练完成后，连续三天静脉注射CART55-102抗体(2mg/kg，4mg/kg，8mg/kg)，其中4mg/kg和8mg/kg剂量能够完全逆转吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱效应(P均为P＜0.01)，然而2mg/kg剂量虽能明显改变小鼠在吗啡诱导下的条件性位置偏爱效应(P＜0.05)，但作用维持时间较短；在条件性位置偏爱的点燃重建实验中静脉注射过CART55-102抗体的小鼠都没有被重建。 结论：预防性给CART55-102抗体能明显抑制由吗啡训练引起的小鼠条件性位置偏爱的形成；治疗性给抗CART55-102抗体能明显改变小鼠吗啡诱导的条件性位置偏爱，且在两小时后产生效应；连续治疗性给予CART55-102抗体能彻底改变吗啡诱导形成的小鼠条件性位置偏爱；连续治疗组能够明显抑制条件性位置偏爱的点燃重建作用。以上结果进一步证明了CART可能是一种内源性精神活性物质，而CART55-102抗体可能具有对抗吗啡成瘾的精神依赖的潜力。

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文献综述 阿片成瘾的机制

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