CD133在人肝细胞癌中的表达特点及其同患者临床病理因素的关系

摘要

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)是在中国位于第三位，全世界位于第六位的常见恶性肿瘤。2000年全球肝细胞癌发病数为56.4万人，其中约55％在中国。由于肝细胞癌恶性程度高，术后易复发，对放疗化疗等传统手段不敏感，因此其总体疗效仍不理想。 近年来肿瘤干细胞理论的提出使人们对肿瘤的生物学行为有了新的认识，该理论认为，肿瘤组织中存在一小群具有自我更新和多向分化能力的肿瘤干细胞，是肿瘤形成的起始细胞，可能是肿瘤发生、发展、转移、复发的根源。迄今，肿瘤干细胞理论已经在包括白血病、乳腺癌、脑肿瘤、结直肠癌及胰腺癌等许多系统的恶性肿瘤中取得实验方面的支持，在这些实验中，细胞膜表面糖蛋白CD133经常被用作筛选肿瘤干细胞的表面标记物。肝癌干细胞领域的研究也表明，在肝细胞癌的发生发展过程中可能也有肿瘤干细胞的参与，这些实验结果显示，CD133阳性肝癌细胞具有更强的克隆形成能力、更高的增殖活性及体内成瘤性，表明CD133抗原可能是肝癌干细胞的表面标记物。更加深入地了解CD133抗原在肝细胞癌中的表达情况将有助于我们认识该抗原在肝细胞癌生物学行为中的作用，并为将来基于CD133阳性肝癌细胞的治疗研究提供实验参考。 因为现有肝癌干细胞研究主要是以肝癌细胞系为研究对象进行的，这些细胞系在体外长期培养过程中因其培养条件的不同，其自身特性可能会发生一些未知的改变，从这些细胞系中分离得到的CD133阳性肝癌细胞及基于此所得出的结论也就可能与体内的真实情况不相吻合，也无法明确说明CD133抗原是否为肝癌干细胞的表面标记。而CD133抗原在人肝细胞癌组织中的表达情况及其临床意义，也少见报道。 本研究以免疫组织化学为主要手段，系统地对CD133抗原在人正常肝脏、肝炎后肝硬化组织、肝细胞癌及癌旁肝组织、肝细胞癌门静脉癌栓、肝细胞癌肺转移瘤、肝癌细胞系移植瘤、FAH-/-小鼠诱发肝细胞癌标本中的表达情况及CD133抗原同AFP抗原及Ki-67抗原的共表达情况进行了研究，对CD133抗原表达同肝细胞癌患者主要临床病理特征的关系进行分析。 我们的研究结果表明：1、人肝细胞癌组织中CD133抗原的表达同患者血清AFP水平、有无肝硬化、肿瘤分级及肝细胞癌组织中AFP抗原及Ki-67抗原的表达有显著相关性，CD133抗原多表达于血清AFP水平高、合并肝硬化、肿瘤分级差及高表达AFP抗原及Ki-67抗原的患者肝细胞癌组织内，其表达可以作为肝细胞癌诊断分级的辅助指标；2、人肝细胞癌门静脉癌栓中CD133抗原表达同原发灶无明显不同，人肝细胞癌肺转移瘤内未见CD133+肝癌细胞，显示人肝细胞癌肺转移瘤的生长可能同CD133+肝癌细胞无关；3、人及小鼠的正常肝组织汇管区胆管上皮细胞、肝炎后肝硬化组织汇管区胆管上皮细胞、肝细胞癌组织内增生的小胆管上皮细胞管腔侧细胞膜均可见普遍的CD133抗原的表达，但其表达与肝癌细胞CD133抗原的表达情况不同，其在肝癌细胞及胆管细胞内的不同表达模式可能代表两种细胞各自不同的分化或功能状态；4、在共表达CD133抗原及Ki-67抗原的肝细胞癌中，CD133+肝癌细胞多出现于高表达Ki-67抗原的区域，但多数CD133+肝癌细胞未见Ki-67抗原表达，表明CD133+细胞可能在短暂进入细胞周期，进行不对称分裂后又返回到G0期，其增殖在平时并不活跃，显示CD133+细胞具有部分肿瘤干细胞样特性。 我们的研究结果显示，虽然CD133阳性肝癌细胞具有部分肿瘤干细胞样特性，并同肝细胞癌的临床病理特征间具有相关性，但其在肿瘤转移中的作用不明确，并且在胆管结构中也广泛表达。这些结果为进一步明确CD133在肝癌生物学行为中所起的作用及其同肝癌干细胞的关系提供了实验依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

一、肿瘤干细胞学说的提出

二、肿瘤干细胞学说的实验依据

三、肿瘤干细胞理论的临床意义

四、肝癌干细胞的研究现状

五、CD133抗原分子在CSCs研究中的现状

六、肝癌干细胞研究中存在的问题

七、本课题的研究内容及拟解决的问题

实验材料

一、患者与标本

二、实验动物

三、肝癌细胞系

四、主要仪器与设备

五、主要试剂及其制备

实验方法

一、组织包埋、切片及免疫化学染色

二、细胞实验

三、Fah-/-小鼠诱发HCC实验

四、统计学处理方法

实验结果

一、CD133抗原在人HCC、癌旁肝组织、肝炎后肝硬化及正常肝脏组织中的表达情况

二、CD133抗原在人HCC细胞系小鼠移植瘤及FAH-/-小鼠诱发HCC中的表达情况

三、CD133抗原和AFP抗原及Ki-67抗原在人HCC组织中的共表达情况

讨论

一、CD133抗原在HCC中的表达情况及其同HCC的临床病理特征的关系

二、CD133抗原在门静脉癌栓及HCC肺转移瘤中的表达

三、CD133抗原在人正常肝组织、肝炎后肝硬化组织及癌旁肝组织中的表达

四、CD133抗原在人HCC细胞系移植瘤及FAH-/-小鼠诱发HCC中的表达

五、CD133抗原和AFP抗原及Ki-67抗原在人HCC组织中的共表达

参考文献

研究小结

综述一 肿瘤干细胞和肝癌干细胞

综述二 CD133抗原和实体肿瘤干细胞

致谢