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第一章文献综述
1.1次生代谢物在医药领域的重要性
1.2分子生物学的出现对研究和发展天然产物的重要性
1.3代谢工程
1.4遗传改造的酿酒酵母生产具有药用价值的小分子化合物
1.4.1黄酮类和别的苯丙烷代谢途径上的天然产物
1.4.2萜类
1.5代谢物在细胞水平上的分析
1.5.1酶学测定方法
1.5.2色谱质谱联用测定法
1.6数据挖掘
1.7小结
第二章遗传改造酿酒酵母萜类生物合成途径分子生物学的方法建立
2.1前言
2.2材料和方法
2.2.1菌株及常用质粒载体
2.2.2试剂(盒)、酶及引物
2.2.3培养基
2.3自配的主要标准试剂
2.4仪器和设备
2.5方法
2.5.1酵母菌的活化
2.5.2敲除盒的构建
2.5.3感受态酿酒酵母的制备
2.5.4酿酒酵母的转染(LiAc/SS-DNA/PEG酵母转染法)
2.5.5单基因敲除酵母转化子的PCR快速筛选鉴定
2.5.6双敲除酵母菌株的构建
2.5.7Ura3基因的剔除
2.5.8 Ura3基因剔除的验证
2.5.9 DNA或RNA的定量分析
2.5.10 YPD培养液中生长曲线实验
2.5.11生长动力学实验
2.6 结果
2.6.1敲除盒的构建
2.6.2鉴定
2.6.3新菌株的确定
2.6.4时间生长曲线实验(time-growth curve)
2.6.5生长动力学研究
2.7讨论
2.8小结
第三章LC-MS测定酿酒酵母中GGPP的含量的方法建立及其应用
3.1前言
3.2仪器与试剂
3.2.1仪器
3.2.2试剂
3.3酿酒酵母中GGPP的含量测定
3.3.1实验条件
3.3.2方法
3.3.3结果
3.4讨论
3.4.1 pH对质谱响应的影响
3.4.2柱温对峰形的影响
3.4.3遗传改造对于GGPP含量的影响
3.5小结
第四章GC-MS测定萜类生物合成途径上各代谢物的方法建立及其在酿酒酵母中的应用
4.1前言
4.2酵母前处理方法研究
4.2.1仪器和试剂
4.2.2方法与结果
4.3酵母中萜类生物合成途径上各中间体的含量测定
4.3.1仪器和试剂
4.3.2方法和结果
4.3.3样品测定
4.4讨论
4.5小结
第五章 建立荧光分析和化学发光分析细胞有机体生理活动的方法
5.1前言
5.2罗丹明6G(rhodamine 6G)考察酵母菌膜转运蛋白的外排能力
5.2.1试剂:
5.2.2仪器:
5.2.3方法:
5.2.4结果:
5.2.5讨论:
5.3 利用JC-1考察酵母菌膜电位
5.3.1试剂:
5.3.2仪器:
5.3.3方法:
5.3.4结果:
5.3.5讨论:
5.4 利用DCFH-DA检测内源性活性氧
5.4:1试剂:
5.4.2仪器:
5.4.3方法:
5.4.4结果:
5.4.5讨论:
5.5化学发光测量ATP含量
5.5.1试剂:
5.5.2仪器:
5.5.3方法:
5.5.4结果:
5.5.5讨论:
研究总结
参考文献
附录:论文研究中常用的载体图谱
攻读博士学位期间发表SCI论文情况
致 谢