口服乳果糖抑制葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎症

摘要

目的：研究口服乳果糖对葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎症的抑制作用
　　 方法：一、建立动物模型：雄性BABLB/C小鼠(20-24g，8-12周龄雄性小鼠，6只为一组)，随机分配的7个组间进行：正常动物组饮用常规水，腹膜腔注射氢气水组(15ml/kg)，DSS处理组，乳果糖处理组(1000,2000,and3000mg/kg)三个组，乳果糖(3000mg/kg)加上甲硝唑(200mg/kg)，头孢拉定(100mg/kg)处理组。除正常组外，其余组小鼠饮用含有硫酸葡聚糖钠(DSS)的水，构建溃疡性结肠炎小鼠模型。
　　 二、氢分子富集水的制备：使用海军医学系制造的氢气富集-生理盐水制备装置在高压(0.4Mpa)下把氢气溶解在生理盐水下6小时，到达一个过饱和的水平。饱和的氢气盐水储存在4°大气压下的无死隙铝袋中。氢气富集的盐水通过伽马射线辐射灭菌，每周新鲜配制，这样确保浓度一直维持在0.6mm/l。
　　 三、组织病理学观察：横结肠的远端部位制切片，HE染色后镜下检查，结肠损伤和坏死是通过炎症的严重程度和结肠隐窝再生和受损的程度来进行评估的，结肠整体长度。
　　 四、炎症因子相关数据检测：TNF-a和IL-1b的浓度测定：收集结肠组织，在盐水中清洗，然后在冰上用1ml正常的盐水(4°)快速匀浆，ELISA试剂盒测定TNF-a和IL-1b的浓度。吸光值在酶标仪中测定，浓度值依据标准曲线换算得到。样品中的蛋白含量通过考马斯亮蓝分析得到，实验结果用每微克蛋白来校正。MDA与MPO浓度的测定：通过化学方法来测定，详细方法参考厂家的使用说明，结肠组织(100mg，湿重)在2ml10M磷酸盐(ph7.4)溶液中匀浆。12000g离心20min后，上清中的MDA和MPO含量使用相应的试剂盒测定。
　　 五、结肠炎评分依据：1.体重变化：体重没有减少定为0,体重减少1-5％定为1，5％-10％定为2，10％到20％定为3，超过20％定为4。
　　 2.粪便性状：形态正常的颗粒状定义为0,浆状，半颗粒状不能粘附在肛门处的定义为2分，液态粪便不能粘附到肛门处为4分
　　 3.便血状态：没有血定义为0,隐血阳性2分，脓血便为4分。所有这些评分加在一起然后除以三，结果总评分范围在0(健康)和4(最大结肠炎活性)之间。
　　 结果：DSS诱发的病症包括：体重下降，结肠炎评分增加，结肠长度病理性变短，结肠损伤处TNF-α，IL-1β，MDA以及MPO水平的升高。但在乳果糖处理以及腹腔注射氢气水后，上述病症得到了显著的抑制。通过抗生素去除结肠微生物后，乳果糖的这种抗炎效果就显著减弱了。组织学分析也表明乳果糖和氢气可以显著抑制DSS介导的结肠组织破坏和伴随的中性粒细胞浸润的过程。
　　 结论：研究表明乳果糖可以阻止DSS诱导的结肠炎的发生以及减轻结肠炎中的氧化应激状态。