CX3CL1-CX3CR1轴的表达水平与胰腺导管腺癌不良预后的相关性研究

摘要

研究背景：
　　 流行病学研究发现，在欧、美等西方国家，胰腺癌排名恶性肿瘤死因的第4位[1]，发病率呈逐年上升趋势，我国上海等经济发达地区胰腺癌发病率已接近欧美高发地区的水平。胰腺癌发病隐匿，早期即出现局部侵袭和远处转移，并且缺乏有效的治疗手段，预后极差[2]。在目前手术结合放化疗等综合治疗的情况下，胰腺癌患者的总生存时间仍然没有明显延长，中位生存期仅为14-22个月[3]。在临床上急需新的策略及治疗方法的同时，我们也在努力寻找新的可以预测预后的生物标记和潜在的治疗靶点。最近，越来越多的研究证明趋化因子在恶性肿瘤的生长、侵袭和转移等多方面发挥着重要作用。
　　 趋化因子是具有化学趋化性的小分子分泌性蛋白超家族，最早发现在白细胞转运中发挥着重要作用，调控白细胞、淋巴细胞、单核细胞的粘附和穿越内皮的移行。根据临近氨基末端高度保守的两个半胱氨酸的数量和间隔特点将其分为4大类：CXC、CC、C和CX3C。CX3CL1是趋化因子CX3C家族的唯一成员，克隆来源于活化的上皮细胞及神经元细胞，最初被称为Fractalkine或Neurotactin[4，5]。不同于其他的趋化因子，CX3CL1有膜结合型和分泌型两种存在形式，膜结合型具有提高细胞之间粘附的作用，分泌型则具有趋化表达CX3CR1细胞的功能[6]。CX3CR1是CX3CL1唯一的受体，属于跨膜G蛋白偶联受体超家族，具有7次跨膜结构[7，8]。CX3CR1在NK细胞、CD8+T细胞、单核细胞和树突状细胞上均有表达。过去认为，CX3CLl仅在神经系统内广泛表达，近期的研究发现，CX3CL1-CX3CR1轴在许多不同类型的恶性肿瘤中都有表达，如：结肠癌、前列腺癌、胃癌等等[9，10,11]。并且，最新的研究证实，CX3CR1在正常胰腺导管上皮细胞中不表达，但是在胰腺导管腺癌的肿瘤细胞中高表达，特别是在侵犯胰腺内神经的肿瘤细胞中高表达。当在检测胰腺内神经是否有CX3CL1表达时，意外地发现CX3CL1在肿瘤细胞中亦有表达，并呈弱阳性[12]。但CX3CL1在胰腺导管腺癌肿瘤细胞中的表达水平尚无明确报道。
　　 趋化因子属于特殊的炎症相关因子，许多研究发现它与肿瘤的关系密不可分。表达CX3CL1的肿瘤细胞可以趋化表达CX3CR1的具有细胞毒效应的淋巴细胞向肿瘤迁移，达到抗肿瘤的目的。综合CX3CL1粘附和趋化的双重功能，CX3CL1-CX3CR1轴在恶性肿瘤的生长、侵袭和转移中可能发挥抗肿瘤或者促肿瘤的作用[13]。在结肠癌中，CX3CL1的表达与肿瘤中淋巴细胞浸润密度的增加及良好的预后密切相关[9]。然而，在前列腺癌研究中发现，CX3CR1参与了前列腺癌细胞骨转移的过程，并发现骨上皮细胞分泌趋化因子CX3CL1[10]。最近的研究发现，CX3CR1与胰腺导管腺癌的周围神经侵犯及术后的局部复发密不可分[12]。但是，CX3CL1-CX3CR1轴对胰腺导管腺癌生物学行为及胰腺导管腺癌患者预后的影响尚不清楚。
　　 研究目的：
　　 检测CX3CL1-CX3CR1轴在胰腺导管腺癌肿瘤组织中的表达水平，并分析CX3CL1-CX3CR1轴的表达水平与胰腺导管腺癌患者各项临床病理指标的关系及对患者预后的影响。为胰腺导管腺癌的治疗寻找新的预后生物标记和潜在的治疗靶点。
　　 研究方法：
　　 1、收集长海医院普三科2007-2009年105例手术的胰腺导管腺癌的石蜡标本，构建胰腺导管腺癌的组织芯片，利用免疫组织化学染色的方法，进行组织芯片的特异性染色。
　　 2、收集长海医院普三科2007-2009年105例手术的胰腺导管腺癌患者的临床病理资料及联系方式，通过电话、信件、门诊等方法进行随访，确定患者总生存期。运用统计学分析软件对组织免疫化学染色结果及临床病理资料和总生存期进行系统性的统计分析。
　　 结果：
　　 1、免疫组化分析：CX3CL1和CX3CR1在癌旁的正常胰腺腺泡细胞和导管上皮细胞中不表达。81例(77.1％)胰腺导管腺癌的肿瘤细胞CX3CL1呈高表达，24例(22.9％)呈低表达。70例(66.7％)胰腺导管腺癌的肿瘤细胞CX3CR1呈高表达，35例(33.3％)呈低表达。63例(60％)胰腺导管腺癌的肿瘤细胞CX3CL1和CX3CR1均呈高表达，17例(16.2％)均呈低表达。胰腺内侵犯神经的胰腺导管腺癌肿瘤细胞CX3CL1和CX3CR1均呈高表达。
　　 2、临床资料分析：CX3CL1-CX3CR1轴在胰腺导管腺癌中的表达水平与患者的各项临床病理指标(年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、病理分期、P53、CA19-9水平)无明显相关性。
　　 3、生存分析：
　　 ①、CX3CL1高表达的胰腺导管腺癌患者总生存期比CX3CL1低表达的患者明显缩短，差异有统计学意义，P值=0.021，生存时间分别为10.51个月及13.14个月。
　　 ②、CX3CR1高表达与CX3CR1低表达胰腺导管腺癌患者的总生存期无明显差异，差异无统计学意义，P值=0.059，生存时间分别为10.41个月及12.50个月。
　　 ③、CX3CL1和CX3CR1均高表达的胰腺导管腺癌患者总生存期比其他患者明显缩短，差异有统计学意义，P值=0.009，生存时间分别为10.08个月及12.64个月。
　　 4、生存过程影响因素分析：
　　 ①、CX3CL1高表达可以作为胰腺导管腺癌独立的阴性预后因素，OR=1.775，P值=0.030。
　　 ②、CX3CR1高表达及CX3CL1和CX3CR1均高表达不能作为胰腺导管腺癌独立预后因素。
　　 结论：
　　 (1)我们首次报道了CX3CL1-CX3CR1轴在胰腺导管腺癌中的表达水平，与癌旁的正常胰腺组织相比，CX3CL1-CX3CR1轴在胰腺导管腺癌肿瘤组织中的表达明显上调。
　　 (2)我们首次评价了胰腺导管腺癌中CX3CL1-CX3CR1轴的表达水平与患者预后的关系，CX3CL1－CX3CR1轴的高表达提示胰腺导管腺癌患者预后不良。
　　 (3)CX3CL1是胰腺导管腺癌新的预后标记。
　　 (4)CX3CL1－CX3CR1轴在胰腺导管腺癌中的表达水平有临床预后价值，并且可以成为胰腺导管腺癌潜在的治疗靶点。