辅助T细胞及相关因子在隐球菌性脑膜炎患者中抗隐球菌效应的研究

摘要

隐球菌性脑膜炎（简称隐脑）是由隐球菌引起的中枢神经系统感染性疾病，该病预后严重，死亡率高。能致人类发病的隐球菌主要有新生隐球菌和格特隐球菌，其中新生隐球菌感染多发生于免疫力低下的人群，突出的表现在艾滋病人人群中，在HIV（+）人群中，每年平均有近百万的隐球菌感染病例。随着实体器官移植术的迅猛发展以及免疫抑制剂的大量使用，隐脑的发病率也越来越高。这都说明人体的免疫系统调节能力在隐脑的发病中起着至关重要的作用。
　　宿主在隐球菌入侵后产生的免疫反应包括天然免疫和适应性免疫，天然免疫主要依赖于补体系统和吞噬效应因子（包括树突状细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞），适应性免疫包括体液免疫和细胞免疫。不论是补体途径还是吞噬效应都受到机体适应性免疫的调节。而辅助T细胞（Th细胞）是具有调节机体体液免疫和细胞免疫功能的细胞，当Th细胞被激活时，可以分泌细胞因子对机体免疫发挥调节作用。
　　鉴于Th1细胞及其相关细胞因子的保护作用以及Th2细胞及其相关细胞因子的非保护性作用在多个实验中已证实，但目前研究发现，除传统的Th1和Th2细胞外，Th细胞还分为Th9、Th17和Th22细胞，其中Th22细胞主要与皮肤的病理生理及稳态相关。所以本研究拟在前期实验基础上通过比较初发隐脑患者在治疗前和治疗后与正常对照病例外周血中Th9、Th17及其相关细胞因子的表达，初步探讨人体感染隐球菌后的抗菌效应，寻找可能的治疗靶点。
　　本研究通过流式细胞仪检测技术检测了12例隐脑患者治疗前后及12例正常对照病例外周血中CD4+T细胞中Th9和Th17细胞所占比例，通过两两比较，发现Th17细胞在未接受治疗的隐脑患者中所占比例较正常对照明显降低，P＜0.05，Th9细胞在未接受治疗的隐脑患者中所占的比例与正常对照相比无统计学差异；经治疗后隐脑患者外周血中Th17细胞所占比例明显上调，与治疗前相比有显著性差异，剔除治疗无好转病例后Th17细胞所占比例与正常对照相比也有显著性增高，Th9细胞所占比例也明显升高，差异有统计学意义。同时，本实验还采取实时定量PCR方法比较了上述病例外周血CD4+T细胞中IL-4、IL-6、IL-9、IL-17、IFN-γ和TGF-β等Th细胞相关细胞因子的mRNA表达水平，发现IL-9和IL-17作为Th9和Th17细胞的主要分泌细胞因子，呈现出与Th9和Th17细胞类似的结果，而TGF-β作为Th17和Th9细胞的诱导分化细胞因子，也表现出同样的表达趋势，且TGF-β的表达水平同IL-9、IL-17都呈明显正相关，P＜0.05，IL-6在隐脑患者治疗后外周血CD4+T细胞中的表达也较正常对照及治疗前明显升高，且与IL-17的表达呈正相关。最后，本实验还建立了小鼠吸入隐球菌感染模型，通过观察感染后不同时期小鼠肺组织病理变化与小鼠肺泡巨噬细胞上相关细胞因子的表达，发现随着小鼠感染病情的加重，巨噬细胞中TNF-β的表达水平明显升高。
　　我们的研究认为TGF-β诱导分化的Th17细胞及其相关细胞因子在隐脑患者抵御隐球菌感染中起重要作用，提示隐脑患者中Th17细胞的缺乏或不应答是导致隐球菌扩散至中枢神经系统引发隐脑的重要致病机制。

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中英文缩略词对照表

前言

第一部分 隐球菌性脑膜炎患者治疗前后外周血CD4+T细胞中Th9、Th17细胞比值及意义

一、引言

二、材料与方法

三、结果与讨论

第二部分隐球菌性脑膜炎患者CD4+T细胞中辅助T细胞相关细胞因子的变化及意义

一、引言

二、材料与方法

三、结果

四、讨论

第三部分 隐球菌感染小鼠模型的建立及感染小鼠肺泡巨噬细胞相关细胞因子的测定

一、引言

二、材料与方法

三、结果

四、讨论

全文总结

参考文献

综述:隐球菌感染的免疫疗法

发表论文与科研工作

一、发表论文

二、科研工作

致谢