复方紫杉醇-拉帕替尼PEg-PLA胶束治疗HER2阳性乳腺癌的研究

摘要

高达30％的侵袭性乳腺癌患者过表达人表皮生长因子受体2(HER2)，这类乳腺癌患者的病情进展较快，无瘤生存期及总生存期短。拉帕替尼临床上主要用于治疗复发转移、对赫赛汀产生耐药的HER2阳性乳腺癌患者，具有诸多临床优势，但存在水溶性差的关键问题，难以制备注射剂;而目前口服拉帕替尼存在生物利用度低、给药剂量大、频次高等问题，导致患者的依从性降低。紫杉类药物（紫杉醇、多西紫杉醇）是目前治疗转移性乳腺癌的主要用药之一，但紫杉类药物高度不溶于水，在注射剂制各时需要以聚氧乙烯蓖麻油及无水乙醇为助溶剂，由此可能诱发患者产生致命的过敏反应，也在一定程度上限制了紫杉类药物的临床应用。两类药物均存在难溶性问题，且在临床上有联合应用的需求。
　　纳米给药系统的问世为临床肿瘤的化学药物治疗创造了新的突破点，以聚合物胶束作为载体既能解决药物的溶解度问题，又能延长药物在体内的循环时间;同时聚合物胶束的纳米级粒径能实现对肿瘤组织的被动靶向作用。
　　本文采用不同的处方工艺，制备了两种复方紫杉醇-拉帕替尼的聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)胶束，以期增加药物的溶解度，同时利用两药物的协同作用提高对HER2阳性乳腺癌的治疗效果。
　　第一章将拉帕替尼与PEG-PLA结合制备LPT-PEG-PLA，再采用薄膜水化法制备L-PPM-PTX胶束，测得紫杉醇的载药量与包封率分别为14.82±2.16％、84.21±9.83％，粒径为25.80±0.47 nm，多分散指数为0.202±0.019。共聚焦荧光显微镜观察见L-PPM-PTX能够通过内体进入细胞内并释放至胞质。流式细胞技术检测药物作用后L-PPM-PTX对于HER2过表达乳腺癌细胞株SKBr-3的抑制作用优于PPM-PTX及L-PPM;而SKBr-3细胞周期分布结果提示其可以同时将细胞阻滞于G2/M及G1/S期。细胞核染色结果与流式细胞检测结果一致。
　　为了解决薄膜水化法的不足，提高拉帕替尼的载药量，第二章以DMSO为溶剂，采用透析法制备复方PPM-PL胶束。以胶束粒径及载药量为考察指标，在单因素考察的基础上，采用星点设计-效应面法对PPM-PL的处方和制备工艺进行优化，最优处方工艺为:mPEG-PLA50 mg，拉帕替尼7.3 mg，紫杉醇7.3 mg，透析时间19.4 h。依据最优处方制备的PPM-PL粒径与多分散指数为20.05±0.09nm、0.193±0.01;拉帕替尼的载药量与包封率为6.02±0.29％、43.88±2.21％，紫杉醇的载药量与包封率为9.93±1.17％、75.60±9.85％。采用HER2过表达细胞株SKBr-3皮下注射构建HER2阳性乳腺癌裸鼠模型，利用小动物活体成像系统考察游离DiR及载DiR胶束在荷瘤鼠体内的分布情况，结果提示载DiR胶束组在荷瘤鼠肿瘤处的荧光强度显著强于游离DiR组，说明共聚物胶束的被动靶向作用使其能在肿瘤部位蓄积，预示有利于抗肿瘤治疗。通过肿瘤体积变化曲线考察PPM-PL对HER2阳性乳腺癌的药效学，结果显示PPM-PL的抗肿瘤效果优于单药或游离单药联合组。
　　综上所述，本文制备的PPM-PL提高了紫杉醇与拉帕替尼的溶解性，利用被动靶向作用使药物蓄积于肿瘤组织并缓慢释放;将两药包裹于同一胶束中可以使其同时到达肿瘤组织发挥协同作用，提高药物对HER2阳性乳腺癌的治疗效果。

目录

声明

摘要

缩略词表

研究背景

第一章 拉帕替尼-PEG-PLA紫杉醇胶束的制备、表征及其抗肿瘤效应的体外研究

第一节 拉帕替尼-PEG-PLA紫杉醇胶束的制备及表征

1．仪器和材料

2．实验方法

3．实验结果

第二节 拉帕替尼-PEG-PLA紫杉醇复方胶束抗肿瘤效应的体外研究

1．仪器及材料

2．实验方法

3．实验结果

本章讨论与小结

1．讨论

2．小结

第二章 复方紫杉醇-拉帕替尼PEG-PLA胶束的工艺优化及其在荷瘤鼠体内分布和药效的初步研究

第一节 复方紫杉醇-拉帕替尼PGE-PLA胶束的制备工艺优化及表征

1．仪器与材料

2．实验方法

3．实验结果

第二节 复方紫杉醇-拉帕替尼PGE-PLA胶束体内药效的初步研究

1．仪器与材料

2．实验方法

3．实验结果

本章讨论与小结

1．讨论

2．小结

全文总结

参考文献

综述 人表皮生长因子受体2(HER2)在肿瘤诊断治疗中作用研究进展

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致谢