醛酮还原酶家族1的C1亚型在胆管癌发生发展中作用及机制

摘要

目的：近年来，关于肿瘤代谢相关研究越来越多，代谢异常与肿瘤的发生、发展、复发及转移相关，且许多代谢相关蛋白已用作肿瘤诊断的标记物或治疗的靶点。消化系统的肿瘤胆管癌是指源于肝管和肝外胆管的癌，约占肿瘤发生率的3％。目前，胆管癌的研究已成为热门，虽然有很多学说来解释其发病机制，但并不全面，所以，深入研究胆管癌的发生机制，有可能为胆管癌的发生、发展、复发及转移提供新思路，为非手术治疗提供新的突破口。醛酮还原酶(Aldo-keto reductases AKRs)是参与氧化还原反应的三大酶类超家族之一，广泛地分布于原核生物和真核生物。AKRs以烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(triphosphopyridine nucleotide NADPH)为辅酶，参与氧化还原反应。本文旨在研究AKRIC1(Aldo-keto reductase family1 member C1)在胆管癌中的表达，并初步探讨其在胆管癌发生、发展及转移中的作用。
　　方法：采用消化系肿瘤组织芯片和免疫组化分析方法，检测癌组织和正常组织AKR1C1的表达;实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞株AKR1C1的表达;蛋白免疫印迹western blot检测肿瘤细胞株及10例胆管癌病人肿瘤组织、癌旁组织和正常组织AKR1C1的表达;在胆管癌细胞株QBC939中感染沉默AKR1C1的病毒质粒及空质粒，CCK-8(Cell Counting Kit-8)比色法检测各实验组细胞增殖;划痕实验和transwell检测各实验组细胞的迁移情况;流式细胞术技术检测各实验组QBC939细胞的周期阻滞和凋亡情况;RT-PCR和Western-blot方法分别检测各实验组QBC939细胞survivin、Bcl-2、Bax、caspase-3、β-catenin和E-cadherin的mRNA和蛋白表达情况。
　　结果：
　　1.消化系肿瘤组织芯片和免疫组化分析显示:AKR1C1在食管癌、肝癌及胆管癌中呈强阳性;AKR1C1在肠癌中为弱阳性表达;在胃癌中，随着分化程度的降低表达逐渐增强;AKR1C1在胰腺癌中几乎呈弱阳或阴性表达。
　　2.49例胆管肿瘤组织芯片和免疫组化结果显示:不同类型的癌组织与正常组织相比，癌组织中均高表达AKR1C1;western blot验证10例胆管癌患者肿瘤组织、癌旁组织和正常组织AKR1C1表达，确定AKR1C1在肿瘤组织中呈高表达;
　　3.为继续研究AKR1C1与胆管癌的关系，选用胆管癌细胞株进行相关功能学检测，实时荧光定量PCR和western blot检测显示:胆管癌细胞QBC939高表达AKR1C1;
　　4.CCK-8比色法检测感染沉默AKR1C1病毒质粒组细胞与空质粒对照组细胞，沉默组细胞的增殖受到明显抑制，差异有统计学意义(p＜0.05);
　　5.流式细胞术技术检测结果显示，感染沉默AKR1C1病毒质粒组出现细胞周期阻滞，凋亡增加;
　　6.transwell检测结果显示，感染沉默AKR1C1病毒质粒组的细胞迁移率明显降低;
　　7.Real time-PCR和Western-blot方法分别检测各实验组QBC939细胞survivin、Bcl-2、Bax、caspase-3、β-catenin和E-cadherin的mRNA和蛋白表达发现，survivin、caspase-3和E-cadherin变化有统计学意义。证明了上述多个分子与胆管癌的发生、发展及转移有关，但具体通路仍不清楚，需要后续研究验证。
　　结论:AKR1C1在胆管肿瘤组织与肝外胆管癌细胞株QBC939中高表达，其表达状态与胆管癌细胞的发生、发展及转移均相关，可能其参与或间接参与了癌细胞的生长周期调控、凋亡调控及转移相关途径，为胆管癌的相关研究提供了新的思路和方向。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 AKR1C1在消化系统肿瘤的表达

一、材料与方法

二、实验结果

二、讨论

第二部分 AKR1C1基因对胆管癌细胞的增殖、凋亡及迁移影响

一、材料与方法

二、实验结果

三、讨论

第三部分 AKR1C1基因对胆管癌细胞的增殖、凋亡及迁移机制探讨

一、材料与方法

二、实验结果

二、讨论

参考文献

综述 醛酮还原酶家族与疾病

致谢