热消融致甲状腺结节与结周组织HSP70表达变化及其意义

摘要

甲状腺结节是临床常见疾病，其发病率呈逐年上升趋势，随着患者对微创手术诉求的增多，超声引导下经皮热消融技术作为近年来新兴的甲状腺结节治疗方法，已经越来越多的应用于甲状腺结节的临床治疗。在治疗甲状腺结节的外科方法中，超声引导下热消融技术具有多种优点，如手术时间短、全程可视、实时定位，准确灭活、出血量少、创伤轻微、美容效果明显、保护甲状腺功能、可重复性好等[1]。虽然并发症较外科手术发生率少，但也曾出现诸如声音嘶哑、甲状腺功能指标值减低、臂丛神经受损、局部血肿、灼伤皮肤、恶心呕吐、肿瘤破裂等并发症的发生[2]。为确保热消融手术的安全进行，国内章建全[3]率先提出的“液体隔离带法”、娄雪峰等人[4]提出的“半消融杠杆撬离法”等人工措施，对甲状腺周围正常结构起到了较好的保护作用。但在超声引导下甲状腺结节热消融操作过程中，消融针的热量不可避免向结节外的周围正常甲状腺组织传导，遗憾的是这两种人工保护措施都不能将甲状腺结节与结节外正常腺体组织截然分离，目前亦未见其他研究者报道独到的结节外正常甲状腺组织人工保护措施。那么是什么机制使得热消融治疗后正常甲状腺组织得以免受损伤并保持正常的功能的呢？显然需要从患者机体自身的保护机制寻找研究的切入点。 当前，在热损伤保护领域研究较多的内容之一是热休克蛋白（Heat Shock Protein，HSP）。HSP是机体遇到各种理化、生物等刺激产生的一组蛋白，又称应激蛋白（Stress Protein）。HSP具有多种生物学功能，其中最为突出的是其细胞保护作用，被公认为是人体内的一种保护蛋白[5]。HSP70（Heat Shock Protein70，HSP70）是HSP家族中最为重要、最受关注、研究最深入的一个成员，在受到刺激后迅速表达迅速增量，在细胞保护等方面发挥综合作用。据此，我们推测甲状腺结节热消融术后，受热范围内的组织内HSP70表达应该增加，但这种增加对于甲状腺结节和结节外正常腺体组织究竟是保护作用还是其它效应尚不为人知。因此，将HSP70的表达研究与甲状腺热消融治疗关联起来显然是一种新颖的探索。 因此，本课题试图对超声引导下热消融治疗对甲状腺结节与结周组织HSP70的表达及其潜在意义进行探讨。首先，初步了解HSP70在不同病理类型及不同超声特征的甲状腺结节中的自然表达情况；然后，对甲状腺结节热消融前后组织内HSP70的表达及变化进行了检测、比较、分析；最后，观察了甲状腺结节消融术后随访的部分患者陈旧消融区的HSP70的表达及变化。通过以上三个部分的研究，我们初步了解了HSP70在甲状腺结节热消融术前、热消融术中、热消融术后各个阶段的表达情况，分析了其可能的原因及意义，对深入了解经皮热消融治疗甲状腺结节的潜在机制、疗效评估及预后判断有一定的参考价值。 第一部分 不同病理类型与声像特征的甲状腺结节中HSP70表达比较 目的：探讨HSP70在不同病理类型及不同声像图特征甲状腺结节中的表达水平及差异，寻找HSP70在甲状腺疾病发生发展中的可能意义。 对象：2013年12月至2014年8月在上海长征医院超声诊疗科进行热消融治疗的甲状腺结节患者63例。 方法：63例患者均进行详细超声检查，记录超声特征，并于热消融术前进行超声引导下粗针穿刺活检，随机抽取10例患者取正常甲状腺组织进行对照，取得组织学标本经常规HE染色及免疫组织化学EnVision两步法染色，使用半定量评分方法测定组织内HSP70的表达情况。根据不同病理类型分为甲状腺乳头状癌组、滤泡性腺瘤组、结节性甲状腺肿组、桥本甲状腺炎组、正常甲状腺组；根据不同声像图特征分为实性组、囊实性组、伴粗大钙化组、伴微钙化组。对不同病理类型和声像特征甲状腺结节HSP70的表达程度进行统计学分析。 结果：成功取得标本73条，其中甲状腺结节63条，正常甲状腺腺体10条。所有标本中甲状腺乳头状癌10例，甲状腺滤泡性腺瘤24例，结节性甲状腺肿22例，桥本甲状腺炎7例，正常甲状腺组织10例；HSP70的表达阳性率分别为70.0%（7/10）、58.3%（14/24）、50.0%（11/22）、42.9%（3/7）、50.0%（5/10）；不同病理类型甲状腺组织HSP70表达阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。63例结节中实性结节21例，囊实性结节18例，伴粗大钙化组17例，伴微钙化组7例；HSP70表达阳性率分别为52.4%（11/21）、50.0%（9/18）、64.7%（11/17）、57.1%（4/7）；不同声像特征甲状腺结节HSP70表达阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论：本研究初步探讨了HSP70在不同病理类型和不同声像图特征甲状腺组织中基础表达情况，提示HSP70在正常甲状腺组织及各病理类型甲状腺结节中广泛存在。现有证据尚不足以说明HSP70在不同声像特征和病理类型的甲状腺结节中表达及表达程度有差异。 第二部分 甲状腺良性结节热消融术中腺体组织内HSP70表达的变化 目的：探讨甲状腺良性结节射频消融后组织内热休克蛋白70（heat shockprotein,HSP70）表达的变化及其潜在意义。 对象：2013年9月至2015年9月在上海长征医院超声诊疗科进行超声引导下经皮射频消融治疗的甲状腺实性结节患者52例。 方法：对52枚甲状腺良性实性结节实施超声引导下射频消融治疗，设定结节的中央区、边缘区和过渡区，于消融前后对应各穿刺取材1次，采用免疫组织化学染色法半定量测定其内HSP70的表达，对比消融前后HSP70的表达差异以及消融后各区域HSP70的表达差异。 结果：52枚甲状腺实性结节中央区和边缘区HSP70的表达在消融前、后无明显差异，过渡区HSP70的表达消融后强于消融前（P＜0.05）；消融治疗后HSP70的表达存在过渡区强于中央区和边缘区（P＜0.05），而中央区与边缘区无明显差异。 结论：热消融治疗过程中，结节周围过渡区甲状腺组织内HSP70表达增强尤其显著，可能是有保护结节周围正常腺体组织免受热损伤的一种机制。 第三部分 甲状腺结节热消融术后组织内HSP70表达跟踪 目的：探讨甲状腺结节热消融术后不同时期消融区组织内HSP70的表达水平及变化，寻找HSP70在甲状腺热消融治疗过程中可能的意义。 对象：收集2015年5月至2015年12月至长征医院超声诊疗科就诊的甲状腺结节热消融术后3个月~1.5年复诊患者15例。 方法：进行甲状腺常规超声检查及超声造影，记录陈旧消融区二维、彩色多普勒及超声造影表现。对陈旧消融区进行超声引导下粗针穿刺活检，获得的组织学标本经HE染色对陈旧消融区坏死程度进行评估，并通过免疫组织化学染色方法EnVision两步法检测陈旧消融区HSP70表达情况，并与新鲜消融区内HSP70及陈旧消融区内甲状腺特异性转录因子1（Thyroid-specific Transcription Factor1,TTF1）比较。 结果：15例患者分别为甲状腺热消融治疗后3个月（6例）、6个月（2例）、9个月（3例）、1年（1例）、1.5年（2例），陈旧消融区均表现为原结节部位的境界较清且内部回声不均匀的低回声灶，CDFI显示内部均无血流信号，超声造影显示陈旧消融区无造影剂充填。陈旧消融区HSP70表达阳性率100%（15/15），TTF1表达阳性率13.3%（2/15）；新鲜消融区HSP70表达阳性率100%（15/15），TTF1表达阳性率60.0%（9/15）。陈旧消融区与新鲜消融区HSP70表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；陈旧消融区HSP70与TTF1表达比较，差异有统计学意义（P＜0.05），HSP70表达强于TTF1；新鲜消融区HSP70与TTF1表达比较，差异无统计学意义（P＜0.05）；陈旧消融区与新鲜消融区TTF1表达比较，差异有统计学意义，陈旧消融区TTF1弱于新鲜消融区。 结论：HSP70不同于TTF1，前者在甲状腺热消融治疗术后不同时期均呈阳性表达，超声引导下甲状腺结节热消融术后陈旧消融区内HSP70在随访期间内长期存在，其意义尚不能推及。

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