Kartogenin对滑膜间充质干细胞成软骨分化以及兔软骨缺损修复的研究

摘要

目的:与TGF-β3、BMP-2及DXM联合诱导SMSCs成软骨分化做对比，探索Kartogenin(KGN)对滑膜间充质干细胞(synovial-deprived mesenchymal stem cells，SMSCs)体外成软骨分化的影响;在此基础上，对KGN联合SMSCs体内修复兔软骨缺损进行初步探索，为后续实验打下研究基础。
　　方法:1、体外对新西兰大白兔膝关节SMSCs进行分离，提取，分析其细胞学观察、流式细胞术检查以及成脂细胞、成骨细胞、成软骨细胞分化能力来对SMSCs进行鉴定。2、运用体外PELLET培养法，将SMSCs细胞团分成3组，向三组中分别加KGN，转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)/骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)/地塞米松(dexamethasone，DXM)(T/B/D)以及空白对照二甲亚砜(DMSO)进行成软骨诱导分化培养。培养21天后，分析各组软骨微球相关检查，成软骨细胞分化相关基因表达以及蛋白质的合成，从而探究KGN对SMSCs成软骨分化的能力。3、建立新西兰大白兔软骨缺损模型，将造模后的兔子分成3组，各组分别注射等量的KGN联合SMSCs、单纯SMSCs以及空白对照DMSO。12周后处死兔子，通过新生组织形态观察，组织形态学评分、苏木精-伊红及番红O染色来分析各组软骨修复能力。
　　结果:1、流式细胞术结果显示:CD44、CD105、CD90阳性，CD45阴性，SMSCs具有很强的增殖能力及多向细胞分化潜能。2、在KGN对SMSCs成软骨分化的研究中，KGN组软骨微球直径及重量都强于其他各组，并且蛋白聚糖、Ⅱ型胶原合成也多于其他各组;qRT-PCR结果亦显示KGN组的成软骨分化相关基因表达量最高，蛋白质合成量亦最多。3、KGN对SMSCs修复兔软骨缺损研究中显示，在治疗12周后，KGN联合SMSCs组的软骨缺损处有透明软骨出现，组织修复大体观评分最高，HE染色可见透明软骨形成，胶原纤维排列整齐，番红O染色可见红染区域最大。
　　结论:1、成功分离出了兔SMSCs，并证实分离出的SMSCs具有MSCs特异性表型，且具有多向分化潜能。2、KGN对SMSCs有很强的成软骨分化能力。3、KGN促进SMSCs对软骨损伤的修复。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

参考文献

第一部分 兔滑膜间充质干细胞的分离、提取及鉴定实验

一、前言

二、实验材料

三、实验方法

四、实验结果

五、讨论

六、结论

参考文献

第二部分 KGN与TGF-β3／BMP-2／DEX对兔滑膜间充质干细胞成软骨分化的对比研究

一、前言

二、实验材料

三、实验方法

四、实验结果

五、讨论

六、结论

参考文献

第三部分 KGN联合滑膜间充质干细胞对兔软骨修复的初步探索

一、前言

二、实验材料

三、实验方法

四、实验结果

五、讨论

六、结论

参考文献

综述

硕士期间发表论文和参加科研工作情况

致谢