静脉高压导致的剪应力改变在AIBP调控VEGF表达中的作用

摘要

研究背景:
　　硬脑膜动静脉瘘(dural arteriovenous fistula，DAVF)是指硬脑膜及其附属物（大脑镰、小脑幕）上的动脉与脑皮层静脉或静脉窦间发生的异常血管短路，持续性的静脉高压会引发脑出血、脑水肿、静脉性梗死、认知功能下降等神经功能障碍。在临床上，复杂性DAVF仍然难以通过外科治疗得到完全治愈，明确该病发生发展的原因尤为关键。在对DAVF的病因学的研究中，发现静脉高压导致的血管新生起到关键作用，因此明确血管新生在硬脑膜动静脉瘘发病机制中的作用，成为控制该类疾病进展的重点。
　　实验目的:
　　1.建立不同静脉端压力梯度的大鼠模型，探索静脉端压力改变对上矢状窦剪应力的影响。
　　2.检测AIBP-VEGF介导的血管新生通路中相关蛋白，在不同静脉高压大鼠模型硬脑膜中、在不同剪应力人脐静脉内皮细胞上清液中的表达情况，探索静脉高压造成的剪应力改变对AIBP调控血管新生的影响。
　　实验方法:
　　1.第一部分:建立不同静脉压力梯度的大鼠模型，将80只SD大鼠随机分为4组，每组20只，其中A组20只大鼠行右侧颈总动脉颈外静脉吻合术+左侧横窦出口闭塞术;B组20只大鼠行右侧颈总动脉颈外静脉吻合术;C组20只大鼠行右侧颈外静脉结扎术及右侧颈总动脉结扎术;D组20只大鼠为假手术组，所有大鼠于术后行顶骨磨除术，暴露上矢状窦，测量并计算3个月后上矢状窦剪应力，处死大鼠后，取硬膜组织，检测AIBP、VEGF的表达情况。
　　2.第二部分:按剪应力不同将人脐静脉内皮细胞分为ABCDE四组，根据第一部分大鼠上矢状窦剪应力结果，分别于10、5、2.5、1、0dyn/cm2剪应力环境下培养人脐静脉内皮细胞24小时，取细胞上清行AIBP及VEGF的表达检测，取细胞检测细胞总胆固醇的含量，该部分实验每组各重复进行三次。
　　实验结果:
　　1.第一部分:A组大鼠上矢状窦剪应力为5.32±0.31 dyn/cm2，B组大鼠上矢状窦剪应力平均值2.39±0.03dyn/cm2，C组大鼠上矢状窦剪应力平均值0.97±0.01dyn/cm2，D组大鼠上矢状窦剪应力平均值0.88±0.01 dyn/cm2，A、B组剪应力高于D组，有统计学意义，C、D两组无统计学意义。Western blot及real-time PCR结果为A、B组大鼠硬脑膜中AIBP的表达明显降低，VEGF表达明显增高，与D组之间有统计学差异，C、D组无统计学意义。免疫组化结果可见AIBP在血管全层均有表达。
　　第二部分:A、B、C组高剪应力培养下的脐静脉内皮细胞上清液中，AIBP表达量较E组降低，VEGF表达量较E组升高，P＜0.05;A、B、C组细胞总胆固醇含量较E组表达量升高，P＜0.05。D组细胞上清中检测蛋白及细胞内胆固醇总含量和E组相比，均无统计学意义。
　　实验结论:
　　1.SD大鼠静脉高压模型建立成功3个月后，上矢状窦的剪应力增高，硬膜血管内皮中AIBP表达下降。
　　2.高剪应力条件下培养的人脐静脉内皮细胞AIBP的表达下调，细胞内总胆固醇增加，VEGF表达上调。提示剪应力可能通过调节胆固醇代谢，调控VEGF/VEGFR通道，影响血管新生。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

一、静脉高压诱导的血管新生是诱发DAVF的重要原因

二、静脉高压诱发血管新生的机制研究

三、剪应力调控胆固醇代谢影响VEGF表达

参考文献

材料和仪器

二、体外实验试剂及设备

三、免疫组化试剂及设备

四、实时荧光定量PCR试剂及设备

五、Western blot试剂及设备

六、其他试剂及设备

第一部分：不同静脉高压大鼠模型的上矢状窦剪应力的测量计算

一、实验方法

二、实验结果

三、讨论

参考文献

第二部分：不同剪应力下脐静脉内皮细胞的AIBP表达差异

一、主要试剂配制

二、实验方法

三、实验结果

四、讨论

参考文献

综述 血管新生在硬脑膜动静脉瘘发病中的研究进展

在读期间发表论文和参加科研工作情况

致谢