NGAL在ADV早期肾损伤中的表达及临床应用价值的初步研究

摘要

目的:
　　长期口服阿德福韦酯(ADV)治疗慢性乙型病毒性肝炎最常见的不良反应是肾功能损伤，目前临床上常用SCr、BUN、eGFR、血磷等作为ADV肾损伤的诊断指标，但这些传统指标对诊断早期肾损伤敏感性和特异性较低。已有大量研究证明中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)对各种病因引起的急性或慢性肾损伤均有很好的诊断价值。本研究通过横断面研究检测ADV单药或联用其它核苷（酸）类似物(NA)的慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者的血清及尿NGAL浓度水平，与SCr、eGFR、CysC、血磷等比较在ADV早期肾损伤的临床诊断价值。同时通过动物实验，研究NGAL在长期灌服ADV等核苷（酸）类似物大鼠肾脏损伤模型中的表达水平及部位。
　　方法:
　　本研究共有两部分:第一部分，临床横断面研究。选取2016年2月到2016年11月在长海医院感染科门诊长期口服ADV单药或ADV联合LAM、ADV联合ETV的CHB患者124例。跟据患者的eGFR水平分为正常肾功能组（A组:eGFR≥90ml/min）91例，肾功能损伤组(B组:eGFR＜90ml/min)33例，选取同期在门诊随访的55例HBV稳定携带者，63例口服ETV患者作为对照组。整理患者门诊检查的eGFR、SCr、CysC、血磷等肾脏传统指标。通过酶联免疫吸附试验获得各组CHB患者的血清和尿NGAL浓度。统计分析比较NGAL与其他传统肾损伤标记物对诊断ADV引起的早期肾损伤的敏感性，Pearson相关分析进一步了解血清和尿NGAL与年龄、性别、SCr、eGFR，CysC、β2-MG、尿微量白蛋白、血磷之间的相关性。年龄分层下比较ADV肾功能损伤组NGAL浓度差异。
　　第二部分，研究NGAL在ADV、TDF、ETV诱导的大鼠肾脏中的表达及部位。通过长期给予SD大鼠ADV、TDF、ETV，建立相应药物诱导的肾损伤模型，分别于8周、12周、16周检测并分析各组大鼠血清和尿NGAL的水平，通过HE染色了解各组大鼠肾脏的病理变化，免疫组化法检测肾脏组织中NGAL表达程度及部位。采用SPSS22.0软件处理数据，P＜0.05代表差异有统计学意义。
　　结果:
　　1.血清NGAL虽然在ADV肾损伤组高于其它各组，但无统计学意义(P＞0.05)。ADV肾损伤组尿NGAL明显高于ETV组和稳定携带组，差异有统计学意义，但尿 NGAL升高并没有血清肌酐和胱抑素C明显。
　　2.相关性分析发现，血清和尿NGAL成正相关，两者与年龄成正相关(P＜0.05)，与性别、服药时间、TB、eGFR、肌酐、胱抑素C、血钙、血磷、β2微球蛋白无相关性，此外尿NGAL与尿微量白蛋白成正相关(r=0.435，P＜0.05)。根据年龄分层结果显示，年龄越高，血清和尿NGAL越高，且50-59岁组、大于59岁组与小于50岁组比较有统计学差异(P＜0.01)。
　　3.动物试验中，血清和尿NGAL随着用药时间延长逐渐升高，在ADV组，16周血NGAL明显高于12周，差异有统计学意义(P＜0.05)，16周尿NGAL高于8周和12周，差异均有统计学意义;在TDF组中，16周血和尿NGAL明显高于8周(P＜0.05);ETV组和对照组在8周、12周、16周均无统计学差异(P＞0.05)。各组在同一时间点分析发现，ADV组血清和尿NGAL水平在8周、16周明显高于空白对照组和ETV组;TDF组血清和尿NGAL仅在16周与对照组比较有差异;ETV组血清和尿NGAL在8周、12周、16周与对照组均无明显差异。HE染色发现，在第8周，ADV组肾小管上皮细胞出现肿胀，12周、16周肾小管上皮细胞肿胀加重，可见空泡变性，肾小管细胞刷状缘脱落，部分管腔内可见蛋白管型。TDF组在16周肾小管上皮细胞有轻度颗粒变性，未见管型;所有各组肾脏间质和肾小球无明显变化。免疫组化显示NGAL主要表达于肾小管上皮细胞，肾间质和肾小球有少量表达。ADV组在12周、16周NGAL表达高于对照组，TDF组在16周NGAL免疫组化结果与对照组有统计学差异，且表达强度与病理损伤时间有一定的相关性，ETV组和与对照组无明显差异(P＞0.05)。
　　结论:
　　1.ADV肾损伤组患者尿NGAL明显高于对照组，但尿NGAL诊断ADV早期肾损伤敏感性没有肌酐、胱抑素C高，血清NGAL对ADV早期肾损伤无诊断价值。
　　2.血清NGAL与年龄成正相关，尿NGAL与年龄、尿微量白蛋白成正相关。NGAL对ADV引起的高龄CHB患者肾损伤有更好的诊断价值。
　　3.在大鼠实验组，随着ADV、TDF用药时间的增加，血清和尿NGAL水平明显升高，尿NGAL比血清NGAL升高更明显。肾组织中NGAL主要表达于肾小管上皮细胞，在ADV组表达最强，且表达程度与病理损伤时间有一定的相关性。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 NGAL在ADV肾损伤的早期诊断价值

一、研究对象

二、主要仪器与试剂

三、实验方法与步骤

四、统计学方法

五、实验结果

六、讨论与分析

第二部分 NGAL在核苷(酸)类似物致肾损伤SD大鼠模型中表达

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

四、讨论与分析

小结

参考文献

综述 阿德福韦酯相关肾损伤及早期肾损伤诊断标志物研究进展

在读期间发表论文

致谢