猪水疱病病毒基因组全序列分析及VP2基因在大肠杆菌中的表达

摘要

研究和分析SVDV基因组一级结构是深入研究SVDV的基础,通过基因重组技术表达SVDV VP2基因抗原区的蛋白,为建立以重组蛋白为检测抗原的猪水疱病诊断方法奠定了基础.该研究包括以下两方面的内容:1.SVDV基因组全序列分析应用RT-PCR技术获得SVDV HK'70分离株覆盖全基因组的6个cDNA片段,序列测定后得到全序列.此序列经计算机分析后表明,该毒株基因组全序列长度为7401nt(polyA尾巴除外),大开放阅读框架的长度为6 555nt,编码一条由2 185个氨基酸组成的多聚蛋白.5'NCR和3'NCR(poly A尾除外)长度分别为743nt和103nt,1A,1B,1C,1D的长度分别为207nt,783nt,714nt和849nt,2A,2B,2C的长度分别为450nt,297nt和987nt,3A,3B,3C,3D的长度分别为267nt,66nt,549nt和1386nt.序列比较结果表明,HK'70与己发表的SVDVJ1'73,SVDV H/3'76,SVDV(Seerchurn.P等测株),SVDV NET/1/92等株的核苷酸序列同源性分别为98.4%,98.2%,98.2%和91.0%;与柯萨奇病毒CVB1,CVB2,CVB3,CVB4,CVB5,CVB6的核苷酸序列同源性为76.0%~80.4%.与SVDV J1'73,SVDV H/3'76,SVDV(Seerchurn.P等测株),SVDV NET/1/92等毒株氨基酸序列同源性分别为98.9%,98.9%,99.0%和96.9%;与柯萨奇病毒CVB1,CVB2,CVB3,CVB4,CVB5,CVB6的氨基酸序列同源性为88.4%~95.3%.2.SVDV VP2基因在大肠杆菌中的表达应用RT-PCR技术,以SVDV HK'70为材料,扩增出结构蛋白VP2基因.酶切PCR扩增产物并与表达载体pGEX 4T-1连接,转化BL21菌体并提质粒,将经酶切,PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX-VP2.检测结果表明,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确,表达载体构建成功.将含有阳性质粒的BL21菌液经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析,结果表明VP2基因在大肠杆菌中得到高效表达,表达量最大时目的蛋白占菌体总蛋白的30%左右,Westren blot 检测表明该蛋白能与SVDV阳性血清结合,具有免疫活性.

目录

文摘

英文文摘

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文献综述

第一章猪水疱病病毒及其在原核系统表达研究进展

1.1猪水疱病病毒分子生物学研究进展

1.2 SVDV病毒基因组的应用性研究领域

1.3原核表达系统概况及其在SVDV上的应用

试验研究

第二章猪水疱病病毒基因组全序列分析

2.1材料

2.2方法

2.3实验结果

2.4讨论

2.5 小结

第三章猪水疱病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

3.5小结

结论

参考文献

致谢

作者简介

附录