小鼠胚胎干细胞和胚胎生殖细胞的分离培养

摘要

为提高昆明白小鼠ES细胞建系效率,实验体外培养了小鼠ES/EG细胞,对影响小鼠ES/EG细胞分离与克隆的某些因素进行了探讨.以昆明白小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层,低糖DMEM添加15%FBS+2.2g/L或3.7g/L NaHCO<,3>+0.1mM2-巯基乙醇+2mM谷氨酰胺+1000IU/mLhLIF+100IU/mL卡那霉素为培养液,分离培养3~3.5日龄小鼠胚胎及8.5dpc~12.5dpc生殖嵴PGCs细胞,并对ES/EG集落进行了鉴定、传代和克隆.主要实验结果如下:1.从712枚昆明白小鼠早期胚胎中成功分离出302个原代ES细胞集落,最高传至9代;从184个胎儿生殖嵴PGC细胞中分离出476个原代EG细胞集落,最高传至8代.2.在添加浓度为2.2g/LNaHCO<,3>的干细胞培养液中胚胎贴壁率、ICM克隆形成率、ES克隆形成率分别为75%、68%和61%;而在添加浓度为3.7g/LNaHCO<,3>的干细胞培养液中胚胎贴壁率、ICM克隆形成率、ES细胞集落形成率分别27%、24%和8%,两者差异极显著.3.3日龄桑椹胚和3.5日龄囊胚贴壁率、ICM克隆形成率和ES克隆形成率分别为(30%,30%,18%)和(75%,68%,61%),两者差异极显著.4.自然发情交配获取的囊胚的胚胎贴壁率、ICM克隆形成率和ES克隆形成率(为90%,85%和83%)均显著高于超数排卵交配获取的囊胚(为75%,68%和61%).5.添加外源LIF可显著提高ICM克隆形成率和ES/EG集落形成率,但对胚胎贴壁并无作用;添加浓度范围在250-1000IU/ml时,LIF作用效果不呈量效关系.6.采用

目录

文摘

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文献综述

第一章小鼠胚胎干细胞和胚胎生殖细胞研究进展

1干细胞定义及生物学特性

2 ES/EG细胞研究历史

3 ES/EG细胞系的建立与鉴定

4 ES/EG细胞更新机制

5 ES/EG细胞应用前景

实验研究

第二章小鼠胚胎干细胞分离培养

1.材料与方法

2.实验结果

3.讨论

4.结论：

第三章小鼠胚胎生殖细胞分离培养

1. 实验材料

2.方法

3实验结果

4.讨论

5.结论

参考文献

致谢

作者简介

附图