百合查尔酮合成酶基因（CHS）及其启动子的克隆与分析

摘要

百合是世界五大切花之一，花朵硕大，花色各异，花姿优雅，倍受人们的青睐。但是，百合随着花朵的开放而迅速衰老，如何延长花朵的寿命已成为近年来科学家们研究的主要课题之一。在百合切花衰老机理研究的基础上，通过构建百合ACC氧化酶基因的RNA干扰载体，将其转入百合中表达，将会明显达到延缓其衰老的目的。本研究旨在得到百合花器官中特异、高效表达的启动子，为载体构建提供有效的调控元件，使外源基因只在花中特异表达，达到时空特异表达的目的。本研究取得的主要结果如下： 1.获得百合查尔酮合成酶基因(CHS)的cDNA片段以东方百合‘sobonne’为材料，提取花瓣组织RNA，根据Genbank已发表的查尔酮合成酶基因(CHS)的保守序列设计简并引物，通过RT-PCR获得了约900bp的目的片段，经克隆测序，该试验片段长873bp，与已发表的百合中CHS基因的同源性达到91％以上，说明克隆的片段属于查尔酮合成酶基因。该序列已在GenBank上登陆，登陆号为：DQ471950。 2.获得了百合查尔酮合成酶基因(CHS)的DNA全长序列在获得CHScDNA序列的基础上，重新设计CHS基因的引物，以基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得了大约1300bp的目的片段，经克隆测序后表明，该片段长1307bp，与已得到的cDNA序列对比分析，CHS基因DNA序列包含两个外显子和1个内含子。该序列已在GenBank上登陆，登陆号为：DQ471951。 3.获得了百合查尔酮合成酶基因(CHS)上游调控区本研究比较应用了接头连接PCR和UnevenPCR两种染色体步移方法对CHS基因的上游序列进行克隆。结果表明，通过接头连接PCR，结合应用了巢式PCR，降落PCR，热启动PCR和两步PCR的特点，克隆了约898bp的百合CHS基因的上游调控序列。在启动子数据库PlantCARE中分析表明，该序列为一条未经报道的新序列，该序列具有花中专一性表达的基本保守区‘TACPyAT’，并且具备与转录起始有关的TATA盒，辅助转译的CAAT盒，G盒，CCAAT等基础启动子所具备的主要顺式作用元件。

目录

文摘

英文文摘

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第一章文献综述

第二章试验部分

第三章讨论与结论

参考文献

附录

致谢

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