具有抑菌作用的几丁质酶产生菌的筛选及产酶条件研究

摘要

植物病虫害是影响我国农业生产的重要原因之一，如何合理有效的对其进行控制是急需解决的问题。几丁质酶具有抑制真菌生长和杀灭害虫的双重作用，但同时几丁质酶又具有种类多、抑菌作用具有特异性等特点。因此，寻找抑菌活性较强的几丁质酶，通过优化几丁质酶组合，使其发挥最大的抑菌作用是至关重要的。为此，本研究主要从土壤和植物体内分离筛选几丁质酶产生菌，以油菜菌核病菌和玉米弯孢叶斑病菌为靶标菌测定其抑菌活性，并对筛选到的菌株进行产酶条件的初步研究，以期为酶的分离纯化、性质研究、结构鉴定及通过转基因技术构建几丁质酶工程菌株防治植物真菌病害奠定基础。本研究主要得到以下结果： 1.分别从土壤和植物体内分离筛选到产几丁质酶的细菌、放线菌181株。采用平板稀释分离法和透明圈法，从作物根际土壤中分离筛选到90株微生物，其中有52株能在几丁质培养基上形成透明圈；从分离到的186株植物内生放线菌中得到129株能在几丁质培养基上形成透明圈。比较不同来源菌株的几丁质酶产出率，发现植物内生放线菌的产酶菌株比率较高。 2.以油菜菌核病菌为靶标菌，通过液体培养的方法测定128株(包括52株根际土壤产酶菌和76株植物内生产酶放线菌)产酶菌株无菌培养滤液的拮抗活性。结果表明，有41株菌具有抑菌活性，其中有7株抑菌活性较好，均在60％以上。 3.拮抗放线菌的培养滤液经硫酸铵沉淀后，离心过滤(无菌)得到几丁质酶粗酶液。以油菜菌核病菌为靶标菌，测定粗酶液对靶标菌的抑菌活性。结果表明，拮抗放线菌的几丁质酶粗酶液对靶标菌菌丝生长具有较好的抑制作用。经粗酶液处理后，靶标菌菌丝形态表现异常，菌丝生长受抑制，并表现不同程度的畸形。 4.分别用液体培养和皿内对峙方法测定拮抗放线菌GKSHJA、DBC9和拮抗细菌NKZ-E的抑菌谱，结果发现不同拮抗放线菌对不同病原真菌的抑制表现不同；而拮抗细菌对供试真菌都具有较好的抑制作用。 5.采用液体发酵法对产酶条件进行优化的研究结果表明，内生放线菌GKSHJA在碳源为1％的粉状几丁质，氮源为0.3％的牛肉膏，培养基起始pH为6，32℃培养6d产生的几丁质酶活性最高；土壤放线菌DBC9在碳源为1％的粉状几丁质，氮源为0.3％的NH4NO3，培养基起始pH为7，28℃培养5d产生的几丁质酶活性最高。 6.经插片培养、生理生化特性测定及革兰氏染色的结果表明，菌株GKSHJA和DBC9均为链霉菌，都具有水解淀粉能力，都不能利用纤维素，菌株GKSHJA能较好的使明胶液化，而菌株DBC9没有明胶液化能力；细菌NKZ-E为革兰氏阳性菌。

目录

文摘

英文文摘

研究生学位论文的独创性声明、导师指导研究生学位论文的承诺、关于其他单位与人员对研究生学位论文使用授权的说明

第一章文献综述

第二章材料与方法

第三章结果与分析

第四章讨论与结论

下一步工作设想

参考文献

致谢

个人简介