甘蓝游离小孢子培养中影响胚状体形成的主要因素探讨

摘要

以甘蓝的19种基因型为材料，进行游离小孢子培养。研究甘蓝基因型及其影响因素对小孢子诱导培养的影响，同时以EWlO、EF27、EFl4、秦甘70、秦甘80等为材料，研究花蕾长度、低温处理、高温处理、AgN03、活性炭、激素以及pH值等对甘蓝小孢子诱导培养的影响。主要结果如下： 1.基因型是影响甘蓝小孢子诱导培养成功的关键因素。不同甘蓝基因型小孢子培养的诱导率差异显著。19个供试材料中有16个基因型能诱导胚状体，其中EWl0、EF27、EW09、秦甘70、秦甘80等5个材料胚状体诱导频率较高；有3个材料无法获得胚状体。 2.花蕾大小对小孢子培养的效果有很大的影响。通过花蕾长度进行镜检，发现3.1～4.5mm的花蕾长度的小孢子70％以上都处于单核靠边期和双核早期，表明3.1～4.5mm长度花蕾是诱导胚状体产生的最佳时期。 3.低温预处理和适当的高温处理是小孢子培养中提高胚状体诱导频率的重要因素。低温预处理对小孢子胚产量有显著影响，不同基因型所需预处理时间不同。供试材料经低温预处理，小孢子胚产量均有明显提高。在小孢子培养前对花蕾进行0～4℃48h的低温预处理，并且培养初期给予小孢子33℃24h的高温暗培养，可以获得较好的诱导效果。 4.培养基中添加AgN03对甘蓝小孢子胚状体的诱导没有促进作用，添加AgN03的处理比不添加.AgN03处理的诱导率略低。培养基中添加活性炭对甘蓝小孢子胚状体的诱导有明显影响，在附加活性炭的培养基上，各基因型胚产量所占比率在总体上有大幅度的提高。 5.激素在小孢子诱导培养中具有重要的影响作用，但不同基因型对激素的反映不同。通过对供试材料在NLN-13液体培养基中添加激素6-BA与NAA 5种浓度比例，进行甘蓝小孢子诱导胚状体培养。秦甘70以无激素培养出胚率最高，为3.00胚/蕾；秦甘80以单一加入6-BA0.05mg/L激素出胚率最高，为3.75胚/蕾； EFl4以6-BA0.05mg/1+NAA0.5mg/L激素组合效果较好，其出胚率为2.25胚/蕾；晚丰以6-BA0.5mg/l+0.5mg/1NAA激素组合出胚率较高，为4.25胚/蕾。pH在5.8时有利于诱导胚状体的产生，较高或较低都不利于小孢子胚状体的形成。

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第一章文献综述

1.1植物单倍体培养的机理

1.1.1单倍体涵义

1.1.2离体培养条件下的小孢子发育

1.1.3单倍体培养的意义及方法

1.2前人研究结果综述

1.2.1花药培养研究概况

1.2.2游离小孢子培养研究进展

1.2.3花药培养与游离小孢子培养的区别

1.3小孢子培养技术的应用研究

1.3.1花粉培养与抗病育种

1.3.2花粉培养和远缘杂交育种

1.3.3花粉培养与诱变育种

1.3.4在基因工程中的应用

1.4小孢子培养及应用存在的问题

第二章影响甘蓝小孢子培养产生胚状体的主要因素

2.1供体植株基因型的影响

2.2供体植株的生长状况的影响

2.3取样时期的影响

2.4基本培养基及培养方式的影响

2.5激素及其它添加物的影响

2.5.1激素的影响

2.5.2糖类物质的影响

2.5.3活性炭的影响

2.5.4 AgNO3的影响

2.6 PH值的影响

2.7小孢子密度的影响

2.8环境处理的影响

2.8.1低温预处理的影响

2.8.2热激处理的影响

2.8.3其它处理方法的影响

2.9花粉植株的倍性鉴定和染色体加倍

2.9.1倍性鉴定

2.9.2单倍体植株的加倍处理

2.9.3花粉植株移栽

第三章游离小孢子培养的影响因素研究

3.1试验材料与方法

3.1.1试验材料

3.1.2试验方法

3.2统计与分析方法

3.3结果与分析

3.3.1不同基因型间胚状体诱导效果比较

3.3.2不同花蕾长度对应的小孢子单核靠边期观察

3.3.3不同低温预处理对小孢子胚状体诱导效果比较

3.3.4不同高温预处理对小孢子胚状体诱导比较

3.3.5不同AgNO3浓度处理对小孢子胚状体诱导效果比较

3.3.6培养基中添加活性炭对小孢子胚状体诱导比较

3.3.7不同激素种类、浓度对甘蓝小孢子胚状体诱导比较

3.3.8不同pH值培养基对小孢子胚状体诱导效果比较

3.4讨论

第四章结论

参考文献

附录

致谢

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