杜仲优良品种（无性系）DNA指纹图谱的构建

摘要

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)属于杜仲科杜仲属，是一种以药用为主并具有多种用途植物，作为杜仲资源开发中一项十分重要的基础性工作，杜仲良种选育广受重视。近年来，杜仲许多优良品种(无性系)被陆续选育出来并用于生产栽培，但由于许多品种(无性系)间形态差异不大，因而品种识别较为困难。为了提供有效的杜仲品种鉴别方法，并研究品种之间的遗传差异，本文用RAPD技术对14个杜仲优良品种(无性系)进行了DNA指纹的建立和分析，主要研究结果如下： 1.改进了杜仲基因组DNA提取方法，并对杜仲RAPD扩增反应程序进行了优化。用经过改良的CTAB法提取的基因组DNA可以满足RAPD扩增的要求。本试验最终优化反应体系为： 25μL反应体积中， 10×buffer 2.5μL，TaqDNA聚合酶1U，随机引物(5μmol/L)2.0μL，MgCl<,2>(25mmol/L)2.0μL，dNTP(2.5mmol/L)2.0μL，模板2mg/L，补ddH<,2>O至25μL。扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，37℃退火30s，72℃延伸90s，35个循环，72℃延伸10min，4℃保持产物。 2.对500条随机引物进行筛选，选出32条扩增条带清晰，多态性好的引物。并用这32条引物对14个杜仲品种(无性系)进行了扩增，得到扩增条带191条，其中多态性条带117条，多态位点百分率为61.26％。不同引物扩增的条带数在4-9之间，平均每个引物扩增5.96条。 3.建立了14个杜仲品种(无性系)在引物S465、S480、S486三条引物下的DNA指纹图谱，可作为品种(无性系)鉴定的分子依据。 4.对14个杜仲品种(无性系)的RAPD数据进行了相似系数计算和聚类分析，并建立了14个杜仲品种(无性系)的聚类树状图，品种之间的遗传相似系数分布在0.56-0.93之间，遗传系数均值为0.82。在遗传相似系数为0.82时，可将14个杜仲品种(无性系)划分为5大类别。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章我国的杜仲资源及相关分子标记研究进展

1.1我国的杜仲资源

1.1.1资源分布

1.1.2我国杜仲资源的利用情况

1.1.3国内外杜仲研究进展

1.2分子标记技术的种类和方法

1.2.1分子标记技术的种类

1.2.2本研究应用的RAPD技术简介

1.3 RAPD分子标记技术在林木育种中的应用和研究进展

1.3.1遗传连锁图谱的绘制

1.3.2指纹图谱的绘制分析与品种鉴定

1.3.3林木重要性状的基因定位

1.3.4林木分子标记辅助选择育种

1.3.5种质资源遗传结构，分化和多样性研究

1.3.6种质保存和核心种质的建立

1.4指纹图谱研究意义及其应用前景

1.5本研究的目的和意义

第二章材料与方法

2.1试验材料

2.1.1植物材料

2.1.2试剂与仪器

2.1.3试剂的配制

2.1.4随机引物

2.2试验方法

2.2.1杜仲基因组DNA的提取

2.2.2 DNA质量与纯度检测

2.2.3 RAPD试验方法

2.2.4引物筛选

2.2.5数据收集及分析

第三章结果与分析

3.1杜仲基因组DNA的提取

3.2杜仲RAPD反应体系和反应程序的优化

3.2.1 Taq DNA聚合酶浓度对扩增结果的影响

3.2.2引物浓度对扩增结果的影响

3.2.3 Mg2+浓度对扩增结果的影响

3.2.4 dNTP浓度对扩增结果的影响

3.2.5模板浓度对扩增结果的影响

3.2.6退火温度的选择

3.2.7循环次数对扩增反应的影响

3.2.8 RAPD优化体系

3.3随机引物的筛选

3.4 14个杜仲品种(无性系)的RAPD扩增结果

3.5杜仲品种(无性系)的聚类分析

3.6 14个杜仲品种(无性系)的DNA指纹图谱构建

第四章结论与讨论

4.1结论

4.2讨论

4.2.1基因组DNA的提取

4.2.2基本反应体系

4.2.3 DNA指纹图谱的建立

参考文献

附 录

致谢

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