产PDG杜仲内生菌的分离、筛选及优化培养

摘要

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv．)，单科、单属、单种，是我国特有的经济树种。杜仲作为国家二类保护植物，在现有资源被充分利用的基础上，也需要得到应有的保护。本论文从内生真菌的角度出发，希望在既不破坏现有的杜仲资源的基础上，还能开发出有益于医药事业的天然活性物质，对杜仲进行了内生菌的分离、鉴定，产松脂醇二葡萄糖苷菌株的筛选以及相关培养基的优化，结果如下： 第一，对7年以上杜仲皮中的内生菌进行分离，得到122株内生菌；其中75株真菌，47株细菌；经摇瓶培养后分析各菌株产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的能力，结果发现有8株菌能产生PDG，8株均为真菌；最高产量可达13.387mg/L。经初步鉴定，这8株菌分属于5属，即茎点菌属(Phloma．)、腐霉属(Pythium)、卵形孢霉属(Oospora)、球黑粉霉属(Tolyposporium)、砖红镰孢霉属(Lateritium)。 第二，对已经筛选出的产PDG的8株菌进行了初步研究，获得了高产PDG的菌株，并对其培养基进行了优化，明确了该菌株的生长条件和PDG产生的优化培养基。 第三，采用Plackett-Burman设计(Plackett-Burmail Design，PB)法，对影响供试菌株产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的14个因素进行了筛选。结果表明：影响该菌发酵产生松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的主要培养基成分为麦芽糖、可溶性淀粉、NH<,4>Cl、NaNO<,3>、FeSO<,4>、KH<,2>PO<,4>。在此基础上，再采用响应曲面法(Response Surface Methodology，RSM)对其6个显著因子的最佳水平范围进行研究。通过对二次多项回归方程求解得知，在上述自变量分别为麦芽糖、可溶性淀粉、NH<,4>Cl、NaNO<,3>、FeSO<,4>、KH<,2>PO<,4>时，松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的产量从13.387mg/L提高到了29.386mg/L。

目录

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第一章文献综述

1.1杜仲简介

1.1.1杜仲起源及资源

1.1.2杜仲的药理作用

1.1.3杜仲研究现状

1.2松脂醇二葡萄糖苷

1.2.1松脂醇二葡萄糖苷简介

1.2.2松脂醇二葡萄糖苷研究现状

1.3植物内生真菌

1.3.1内生菌的定义

1.3.2植物内生真菌简介

1.3.3研究目的与意义

第二章材料与方法

2.1实验材料

2.1.1植物样品来源

2.1.2实验菌株来源

2.1.3培养基

2.1.4试剂与仪器

2.2试验方法

2.2.1内生菌的分离纯化

2.2.2产PDG内生菌的筛选

2.2.3松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的测定

2.2.4产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)内生菌的鉴定

2.2.5产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)内生菌培养基的优化实验设计

第三章结果与分析

3.1产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)杜仲内生菌的分离

3.1.1杜仲皮中的内生菌

3.1.2产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的菌株

3.2产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)内生菌的鉴定

3.3产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)内生菌培养基的优化

3.3.1松脂醇二葡萄糖苷(PDG)产生时间的确定

3.3.2菌株碳源、氮源和无机盐的初步筛选

3.3.3超声波破碎与不破碎对松脂醇二葡萄糖苷(PDG)测定结果的影响

3.3.4影响菌株产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的关键因素的确定

3.3.5响应面优化菌株产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的培养基

第四章结论

第五章讨论

5.1产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)杜仲内生菌的分离

5.2产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)内生菌的鉴定

5.3产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)内生菌的优化培养

参考文献

致谢

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