金龟子绿僵菌发酵液成分分析及苦马豆素的初步分离

摘要

目的：通过对金龟子绿僵菌进行传代培养以及液态发酵，获得含有金龟子绿僵菌次级代谢产物的发酵液，并对发酵液进行成分分析，初步确定发酵液的主要物质组成成分。在此基础上，根据组成成分的各自特点，旨在采取离心、分离、萃取、纯化等措施从金龟子绿僵菌中分离得到苦马豆素(swainsonine,SW)，为新型抗肿瘤辅助药物SW的获得提供清晰的分离思路。 方法：(1)采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)对金龟子绿僵菌定期进行传代培养，4℃保存：采用改良查氏培养液对金龟子绿僵菌进行发酵培养，收集发酵液；(2)参照植物成分分析的方法对金龟子绿僵菌发酵液的组成成分进行分析；(3)首先采用高速离心、微孔滤过、树脂吸附等方法对发酵液进行预处理，再运用薄层层析检测技术和紫外分光光度法对目标成分SW进行检测，然后，在强碱性条件下用正丁醇反复萃取、负压层析分离、减压升华等方法对发酵液进行分离提取；(4)采用气相色谱对升华产物中目标成分SW进一步确认。 结果：(1)在25-26℃，湿度45～55％，pH值为6.5～7.0，养分充足的条件下，金龟子绿僵菌生长良好；(2)金龟子绿僵菌发酵液中主要成分包括：生物碱(SW)、氨基酸、蛋白质、有机酸、鞣质、酚类、油脂、挥发油、萜类、甾体，糖类和无机盐，其中生物碱的特征显色反应最为明显；(3)薄层层析和紫外分光光度法检测显示，升华产物中含有与苦马豆素对照品基本一致的特征显色反应和紫外吸收曲线的成分；(4)采用气相色谱法对升华产物进行检测，结果显示其出峰时间、峰形均与SW对照品接近。 结论：金龟子绿僵菌发酵液中确实含有SW，本试验采用的方法，节省了检测时间和试剂的使用量，达到苦马豆素初步分离的目的。

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第一章文献综述

1.1金龟子绿僵菌的研究近况

1.2 SW的研究近况

1.2.1 SW的理化特性

1.2.2 SW的来源

1.2.3 SW的药用研究

1.2.4 SW获得的新途径

1.2.5 SW的检测分析

1.2.6 SW的利用前景

1.3本研究的目的及设计思路

1.3.1本研究的目的

1.3.2本研究的设计思路

第二章金龟子绿僵菌的移接以及发酵液的制备

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与讨论

2.2.1金龟子绿僵菌在培养皿和PDA斜面上的生长性状

2.2.2金龟子绿僵菌在发酵液中的生长性状

第三章金龟子绿僵菌发酵液成分分析

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2方法

3.2结果与分析

第四章金龟子绿僵菌发酵液中苦马豆素的初步分离

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2方法

4.2结果

4.2.1发酵液的处理

4.2.2 TLC结果

4.2.3柱层层析结果

4.2.4减压升华结果

4.2.5紫外分光光度测定结果

4.2.6气相色谱检测结果

4.3讨论

结 论

参考文献

致 谢

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