添加筛选的中药培养液对小鼠体外受精及胚胎发育的影响

摘要

中药是我国特有的资源，中药中的有效成分在动物繁殖中治疗不孕症、流产、保胎及促进精子活力等方面作用突出，还具有抗过氧化效应、清除自由基、促进卵母细胞成熟和细胞增殖等作用。共培养是近10多年来在胚胎培养方面最引人注目的变革之一。共培养能改善胚胎的形态、促进卵裂并有较高的细胞数、提高囊胚的形成率及孵化率。目前，胚胎体外生产技术的累积效率还很低，卵母细胞的存活力与异常卵母细胞的产生也是制约胚胎体外生产的瓶颈之一。本研究旨在探讨一种稳定的适合小鼠子宫内膜上皮细胞培养的方法，筛选能促进体外受精及胚胎体外发育的中药添加剂，并探讨其合适的添加时间，从而构建一种理想的培养体系，以提高胚胎体外生产的累积效率。 本试验为了研究适宜的中药培养液对小鼠体外受精及胚胎发育的影响，进行了三个阶段试验研究：第一阶段是筛选了适合于小鼠子宫内膜上皮细胞的培养方法，获得了高纯度子宫内膜上皮细胞；第二阶段在小鼠胚胎不同培养阶段在培养液中分别加入三种中药添加剂，观察其对体外受精及胚胎体外发育的影响，筛选适宜的中药培养液并确定其合适的添加时间；第三阶段结合前两项试验结果，构建新的共培养体系，观察小鼠体外受精胚胎体外发育的效果。试验结果表明： (1)采用酶消化法可以获得小鼠子宫内膜上皮细胞，但酶会影响细胞活力，致使细胞增殖缓慢，且酶消化法获得的上皮细胞纯度不高；采用子宫翻转组织块培养法培养小鼠子宫内膜上皮细胞，细胞活力高，增殖速度快，可以获得较好的原代培养效果。该方法为下一步研究胚胎共培养提供了可靠的体细胞来源。 (2)经筛选试验表明，0.5mg/L川芎嗪与4mg/L黄芩苷对小鼠体外受精及早期胚胎发育的作用并不十分显著(P>0.05)，且会延缓2-细胞阶段以后胚胎体外发育的速度；0.1mg/L小檗碱在体外受精过程中能显著提高受精卵存活率(48.5％对照组7.5％，P<0.05)，但会严重阻碍受精卵后续阶段的胚胎培养(P<0.05)。 (3)共培养体系能显著降低2-细胞发育阻滞率(46.2％对照组34.2％，P<0.05)。

目录

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声明

第一篇文献综述

第一章小鼠体外受精研究进展

1.1卵母细胞体外成熟

1.2精子获能

1.3体外受精

1.4受精卵的体外培养

第二章早期胚胎体外培养体系研究进展

2.1培养液培养体系

2.2胚胎与单层辅助细胞共培养体系

2.3序贯共培养体系的建立

第三章中药在动物繁殖中的应用

3.1中药在体内的作用

3.2中药在体外的作用

3.3中药的危害

3.4本研究的目的和意义

第二篇试验研究

第四章子宫内膜上皮细胞体外分离培养的实验研究

4.1引言

4.2材料与方法

4.3结果与分析

4.4讨论

4.5 小结

第五章促进体外受精及胚胎体外发育的中药添加剂筛选研究

5.1引言

5.2材料与方法

5.3结果与分析

5.4讨论

5.5小结

第六章受精液中加入小檗碱及共培养对小鼠体外受精胚发育的影响

6.1引言

6.2材料与方法

6.3结果与分析

6.4讨论与小结

结论

创新点

需进一步研究的问题

参考文献

致谢

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